外泌體培養(yǎng)基你選對(duì)了嗎？

      外泌體（exosome）是一種由細(xì)胞內(nèi)多泡體(multivesicular body，MVB) 與細(xì)胞膜融合后，分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中的膜性囊泡。在正常的生理過(guò)程中發(fā)揮著介導(dǎo)細(xì)胞間通訊的重要功能，可用于監(jiān)測(cè)臨床狀態(tài)，治療反應(yīng)，疾病進(jìn)展等，同時(shí)由于它們具有遞送生物分子的功能，因此它們還有發(fā)展成臨床藥物遞送載體的潛力。

外泌體產(chǎn)生于所有類(lèi)型的動(dòng)植物細(xì)胞，并且不同細(xì)胞、不同生長(zhǎng)狀態(tài)的細(xì)胞分泌的外泌體差異性很大，因此，為了得到更高濃度、異質(zhì)性相對(duì)較小的外泌體，細(xì)胞培養(yǎng)上清是外泌體的最佳來(lái)源途徑，細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體濃度低、粒徑小、粒徑分布廣（30-150nm，可能有大囊泡存在），實(shí)時(shí)定量監(jiān)控外泌體分泌情況是工程化外泌體生產(chǎn)的重點(diǎn)也是難點(diǎn)。

納米庫(kù)爾特粒度儀（電阻法RPS）可在單顆粒水平對(duì)外泌體進(jìn)行粒徑濃度分析，可無(wú)標(biāo)記直接檢測(cè)任何培養(yǎng)基類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體，精準(zhǔn)得到外泌體樣本中的完整、真實(shí)的粒徑濃度分布，并且3-5分鐘即可完成檢測(cè)，是外泌體培養(yǎng)工藝開(kāi)發(fā)中的得力助手，可助力篩選最佳的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件。

01篩選無(wú)外源性培養(yǎng)基

傳統(tǒng)的培養(yǎng)基都會(huì)用到牛血清以補(bǔ)充細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)，但血清會(huì)或多或少引入外源性的外泌體，從源頭上造成了后續(xù)外泌體樣本的污染。通過(guò)其他成分代替牛血清，或者經(jīng)過(guò)分離除去外泌體，已經(jīng)有各種類(lèi)型的無(wú)外源性外泌體培養(yǎng)基上市，但都真正做到了沒(méi)有污染嗎？針對(duì)這種疑問(wèn)，筆者選取了八種不同的聲稱(chēng)無(wú)外源性外泌體的培養(yǎng)基進(jìn)行測(cè)試。

圖1.外泌體培養(yǎng)基測(cè)試

通過(guò)測(cè)試可見(jiàn)，并非所有的培養(yǎng)基都做到了真正的無(wú)外源性外泌體，還需擦亮您的眼睛，借助納米庫(kù)爾特粒度儀對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的篩選，挑選合適的培養(yǎng)基。

02培養(yǎng)條件優(yōu)選

在通常的外泌體培養(yǎng)過(guò)程中，都是分離富集后再進(jìn)行測(cè)定，若純度過(guò)低或含量太少，不符合下游研發(fā)需求，則需要重新進(jìn)行培養(yǎng)，消耗大量的時(shí)間成本;亟需一種準(zhǔn)確、可靠和快速的方法實(shí)時(shí)監(jiān)控細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中外泌體的分泌含量，使科研工作事半功倍，納米庫(kù)爾特粒度儀十分符合這種應(yīng)用場(chǎng)景，使外泌體的研發(fā)更高效。

圖2.外泌體培養(yǎng)上清實(shí)時(shí)跟蹤測(cè)試

在對(duì)某培養(yǎng)條件的細(xì)胞上清進(jìn)行跟蹤測(cè)試后發(fā)現(xiàn)，外泌體的濃度在培養(yǎng)第5天時(shí)達(dá)到峰值，往后濃度有所降低，并且粒徑分布也有所變化。

總結(jié)：

納米庫(kù)爾特粒度儀（電阻法RPS）在外泌體生產(chǎn)工藝研發(fā)應(yīng)用中有以下優(yōu)勢(shì)：

1.方便快捷，可以做到實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

2.與樣本折射率無(wú)關(guān)，可應(yīng)對(duì)各種成分的培養(yǎng)基。

3.單顆粒檢測(cè)，大小囊泡之間無(wú)互相影響，可得到真實(shí)的粒徑分布數(shù)據(jù)。

4.直接檢測(cè)外泌體體積粒徑，粒徑準(zhǔn)確度媲美電鏡。

5. 精準(zhǔn)的濃度測(cè)量，可分析不同粒徑范圍內(nèi)的顆粒濃度。