怎樣使用Trypan blue進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)？

生物學(xué)家可以利用多種儀器和消耗品檢測來探索總體細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力。血細(xì)胞計(jì)數(shù)法是手動細(xì)胞計(jì)數(shù)的傳統(tǒng)工具，Trypan blue是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中使用普遍的細(xì)胞排除染料之一。然而，排除染料臺盼藍(lán)仍然是細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用的關(guān)鍵組成部分，而過時的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器已逐漸被 DeNovix CellDrop™ 等創(chuàng)新型自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器所取代。

 即使是基于載玻片的自動化細(xì)胞計(jì)數(shù)也無法與 CellDrop DirectPipette™技術(shù)建立的標(biāo)準(zhǔn)競爭 ，該技術(shù)可以提高臺盼藍(lán)等排除染料的功效。

Trypan blue是主要的細(xì)胞排除染料之一，用于區(qū)分溶液中的活細(xì)胞和死細(xì)胞，以計(jì)算總體活力。它通過滲透受損細(xì)胞膜并與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合來對死細(xì)胞進(jìn)行染色，從而產(chǎn)生深藍(lán)色外觀。這篇文章將更深入地探討臺盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)的一般原理和局限性。

概述Trypan blue細(xì)胞計(jì)數(shù)

Trypan blue是一種偶氮染料，用作多種排除染色劑之一，用于測量懸浮液中活細(xì)胞的數(shù)量，利用活細(xì)胞膜抵抗某些化學(xué)染色劑滲透的原理。用臺盼藍(lán)檢測的細(xì)胞懸浮液將理想地顯示具有透明細(xì)胞質(zhì)（活細(xì)胞）和藍(lán)色細(xì)胞質(zhì)（死細(xì)胞）的細(xì)胞。這有利于使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行簡單的細(xì)胞計(jì)數(shù)。

典型臺盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)測試的一般程序如下：

• 將微量 (μl) 細(xì)胞懸浮液和 0.4% 臺盼藍(lán)染料在蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng) (PBS) 中混合，以達(dá)到所需的比例并使測定的樣品均質(zhì)化。

• 在室溫下孵育適當(dāng)?shù)臅r間，以確保準(zhǔn)確測量細(xì)胞活力。

• 可選：在細(xì)胞計(jì)數(shù)之前進(jìn)行顆?；椭貞?，并根據(jù)需要過濾以去除溶液中的聚集物。

• 將微量樣品移入血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)區(qū)域、細(xì)胞計(jì)數(shù)一次性玻片上，或直接移至 CellDrop 的光學(xué)計(jì)數(shù)室中。

• 使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的網(wǎng)格線手動計(jì)數(shù)染色和未染色的細(xì)胞，或在自動細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)上運(yùn)行適當(dāng)?shù)能浖?，以自動獲取準(zhǔn)確的活力測量值。

臺盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)的局限性

盡管Trypan blue被廣泛用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測試，但它也存在局限性，這使得傳統(tǒng)測量變得復(fù)雜。例如，與血清蛋白相比，Trypan blue對細(xì)胞蛋白的親和力降低，可能會為細(xì)胞形態(tài)的可視化創(chuàng)造具有挑戰(zhàn)性的條件。這可能需要對樣品進(jìn)行分析，然后將其重新懸浮在額外的無蛋白質(zhì)緩沖液中，然后才能進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。