肺炎支原體的靈敏度試驗(yàn)采用支原體肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),主要的步驟包括:實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備及滅菌,添加血清,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH,接種肺炎支原體。本視頻詳細(xì)講解了實(shí)驗(yàn)的具體過程以及如何有效避免污染的操作方法,希望對您有所幫助。
1.培養(yǎng)基的配制及物品的準(zhǔn)備:將陶瓷缸、試管使用蒸餾水沖洗干凈備用,配制海博支原體肉湯培養(yǎng)基于陶瓷缸中溶解,分裝試管,每管8 mL,塞上膠塞。之后將培養(yǎng)基、碳酸鈉溶液、移液槍頭包好,于121℃滅菌鍋中滅菌15分鐘。
2.燒試管口:滅菌結(jié)束后,待培養(yǎng)基冷卻至室溫后,對每支試管灼燒管口,將管口水分烤干,可有效防止污染,膠塞也需過火。此后操作過程中,只要試管進(jìn)行了震蕩操作,特別是震蕩過程中有液體接觸到試管口處的膠塞,均需再次燒口。
3.添加血清:向每支試管中添加2 mL的血清,震蕩均勻。
4.調(diào)節(jié)pH:取三支試管使用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至7.4~7.8,本次確定碳酸鈉平均添加量為0 μL。因此無需添加碳酸鈉即可進(jìn)行下一步操作(注意:均使用滅菌后的碳酸鈉以避免誤差)。
5.接種肺炎支原體:接種肺炎支原體于培養(yǎng)基中混合均勻記為-1,并做梯度稀釋至-9,設(shè)兩支未接種的培養(yǎng)基為陰性對照管。使用封口膜封口,之后放置于36℃±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7-14天。
6.結(jié)果觀察:培養(yǎng)第9天,靈敏度為9。
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