HE染色的實驗步驟及注意事項

一、實驗步驟：

（1）樣品制備：對于貼壁生長細胞，胰酶消化，調(diào)整細胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應時間后，取出細胞爬片，用PBS 洗滌3次。

（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

（4）分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。

（6）吹干或自然晾干細胞 爬片后，中性樹膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

二、注意事項：

1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸li水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、切片染蘇木精后，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色后再行分色。

3、切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹di，應將切片退回無shui酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹di底脫水與透明。

4、在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。

5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。

6、最后封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。