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細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞拉絲的五大常見原因及解決方法

來源:武漢普諾賽生命科技有限公司   2024年07月12日 16:32  


通常情況下,細(xì)胞在體外培養(yǎng)環(huán)境中大多呈現(xiàn)扁平、多角形或圓形等形態(tài),這些細(xì)胞形態(tài)對于細(xì)胞的營養(yǎng)吸收、分裂增殖及物質(zhì)轉(zhuǎn)運等生理活動至關(guān)重要。然而,不少研究者在實際培養(yǎng)過程中會遇到細(xì)胞形態(tài)異常的問題,尤其是細(xì)胞出現(xiàn)“拉絲”現(xiàn)象。這一現(xiàn)象,往往伴隨細(xì)胞狀態(tài)變差,對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性及實驗進展構(gòu)成了不容忽視的影響。




本期細(xì)胞學(xué)堂,我們將為您詳細(xì)介紹細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象可能的原因,并針對性提供解決方法,助您細(xì)胞培養(yǎng)無憂!





細(xì)胞拉絲常見原因及解決方法

拉絲為部分細(xì)胞的正常形態(tài)

某些細(xì)胞株在正常培養(yǎng)過程中,如SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)和K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞),通過光學(xué)顯微鏡觀察(如圖1和2所示)細(xì)胞本身形態(tài)就有拉絲和觸角狀形態(tài),是其正常形態(tài)。

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圖1. SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)

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 圖2. K7M2 wt細(xì)胞形態(tài)

  解決方法:


在初次培養(yǎng)不熟悉的細(xì)胞過程中,若觀察到拉絲現(xiàn)象,首先建議參考權(quán)-威細(xì)胞庫提供的細(xì)胞圖片,以鑒別該細(xì)胞本身是否具有拉絲的形態(tài)特征。對于本身形態(tài)就存在拉絲特征的這類細(xì)胞,無需針對拉絲現(xiàn)象進行特殊處理。然而,如果經(jīng)過對比明確細(xì)胞本身不具有拉絲的形態(tài)特征,且伴隨有細(xì)胞增殖變慢或其他改變時,那么就需要進一步排查可能的原因。




細(xì)胞接種密度過高或過低

細(xì)胞接種密度過高時,細(xì)胞之間的營養(yǎng)和空間競爭會加劇,這種競爭壓力可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)拉絲。若使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,接種密度過低,也可能導(dǎo)致細(xì)胞長不起來,細(xì)胞形態(tài)會逐漸伸長拉絲。

  解決方法:


根據(jù)細(xì)胞的特性,選擇合適的接種密度,并定期進行細(xì)胞傳代,將細(xì)胞密度維持在合適范圍內(nèi)。




培養(yǎng)條件不當(dāng)

如培養(yǎng)基配方錯誤、培養(yǎng)基中關(guān)鍵營養(yǎng)物質(zhì)(如氨基酸、維生素、生長因子等)不足、pH值變化、溫度波動或氣體環(huán)境(如CO?濃度)不適宜,均可能影響細(xì)胞正常形態(tài)與功能,導(dǎo)致細(xì)胞拉絲。

  解決方法:


使用新鮮配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞;根據(jù)細(xì)胞的生長情況,及時換液,確保培養(yǎng)過程中營養(yǎng)充足;必要時可嘗試提高血清使用濃度(終濃度不超過20%)更換高品質(zhì)胎牛血清(如圖3所示)

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圖3. Renca(小鼠腎癌細(xì)胞)細(xì)胞形態(tài)




操作不當(dāng)

在處理如貼壁細(xì)胞等需要消化的細(xì)胞時,解離試劑的選擇、消化時間的控制、操作力度的把握等都至關(guān)重要。解離試劑選擇不當(dāng)、消化時間過長或操作力度過大等均可能導(dǎo)致細(xì)胞受損,進而引發(fā)細(xì)胞形態(tài)改變,出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象。

  解決方法:


針對不同細(xì)胞選擇合適的解離試劑,控制消化時間,在消化過程中操作輕柔,最-大程度降低消化過程對細(xì)胞的損傷。




細(xì)胞污染

在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,若出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲等污染,其與細(xì)胞爭奪營養(yǎng),同時產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的代謝產(chǎn)物,將會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)明顯變差,細(xì)胞可能出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象。

  解決方法:


提高細(xì)胞培養(yǎng)過程中的無菌操作意識,使用無菌試劑、耗材。對于支原體、黑膠蟲等不易察覺的污染,可以定期檢測或空培確定是否發(fā)生污染。及時發(fā)現(xiàn),及時處理,有效防止污染范圍的擴大。



以上就是關(guān)于細(xì)胞拉絲原因及解決方法的詳細(xì)解讀,更多細(xì)胞培養(yǎng)干貨,請持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~


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