核酸提取科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹

應(yīng)用簡介
       核酸提取是分子生物學(xué)的基本組成部分，高質(zhì)量的核酸在分子生物學(xué)上的應(yīng)用至關(guān)重要。核酸提取為大量廣泛研究和應(yīng)用提供了答案（例如：克隆、qRT-PCR和全基因組、轉(zhuǎn)錄組范疇中的二代測序技術(shù)），獲得的核酸可以在分析基礎(chǔ)研究和疾病研究中的基因表達(dá)、跟蹤對藥物治療的反應(yīng)、識別新物種并深入了解進化過程、診斷疾病等方面以不同方式進行應(yīng)用。
技術(shù)原理
       核酸具有貯存和傳遞遺傳信息等重要生物功能，是分子生物學(xué)研究的主要對象。采用常規(guī)吸附柱法抽提樣本中的DNA、RNA，為下游實驗提供高純度和高濃度的模板。
DNA提取方法：對基因組DNA的提取方法主要有CTAB，SDS和其他如玻璃珠法，酶法等。質(zhì)粒DNA的提取主要有堿裂解法和煮沸法；線粒體，葉綠體DNA的提取主要有差速離心結(jié)合SDS法。
RNA提取方法：異硫氰酸胍/苯酚法。基本實驗原理：細(xì)胞在變性異硫氰酸胍作用下裂解，核酸釋放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分別于體系的中間相與水相，得以分離。進行有機溶劑抽提，沉淀，得到純凈RNA。
實驗方法

技術(shù)總結(jié)
       1、細(xì)胞裂解法
       物理方式：煮沸法、玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法、勻漿法
       化學(xué)方式：表面活性劑(SDS法)、堿裂解法
       生物方式：酶法(溶菌酶、蛋白酶K等)
       2、常見樣本提取方法
       總結(jié)濃鹽法：利用RNA和DNA在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離。
       有機溶劑提取法：有機溶劑作為蛋白變性劑，同時抑制核酸酶的降解作用。
       高度梯度離心法：利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物。
       吸附材料結(jié)合法：①硅質(zhì)材料高鹽低PH值結(jié)合核酸，低鹽高PH值洗脫②陰離子交換樹脂低鹽高PH值結(jié)合核酸，高鹽低PH值洗脫③磁珠磁珠微粒包裹上不同基因可吸附不同的目的物，從而達(dá)到分離目的。
       胍鹽提取結(jié)合二氧化硅吸附法：二氧化硅具有特異吸附核酸的特性，異硫氰酸胍可使細(xì)胞裂解，因此在高濃度異硫氰酸胍存在下，從細(xì)胞包括細(xì)菌或者病毒顆粒中釋放出來的核酸成分可以結(jié)合在二氧化硅上，利用此特性可提取血液和尿液中的DNA和RNA。
       TRlzol試劑提取RNA：用TRlzol試劑裂解細(xì)胞，再加入氯仿，離心后可見三層，上層為透明的水相含有RNA,中間含有DNA，下層為紅色的有機相，含蛋白質(zhì)。
       離心柱提?。弘x心柱技術(shù)是用于微量核酸分離純化的較為簡單的方法，屬于硅吸附方法的一種，在原理上可分為三個部分：①利用裂解液促使細(xì)胞破碎，使細(xì)胞中的核酸釋放出來。②把釋放出來的核酸特異吸附在特定的硅載體上，這種載體只對核酸有較強的親和力和吸附力，對其他生化成分如蛋白質(zhì)、多糖、脂類則基本不吸附，因而離心時被甩出柱子。③把吸附在特異載體上的核酸用洗脫液洗脫下來，分離得到純化的核酸。
       磁珠法：依據(jù)與硅膠膜離心柱相同的原理，運用納米技術(shù)對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下，能從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中的DNA和RNA分離出來，可應(yīng)用于臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。
常見問題
       洗脫產(chǎn)物DNA量很少或沒有？
       樣品中細(xì)胞濃度低；
       樣品裂解不充分；
       DNA吸附不充分。
       DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實驗？
       乙醇有殘留；空離完成后再將吸附柱置室溫或溫箱2min左右，che底去除乙醇。
       核酸降解？
       樣本不新鮮（尤其對于RNA而言）；
       前處理不當(dāng)（樣本量過大）。