實(shí)驗(yàn)室培育細(xì)胞如何無菌操作？

實(shí)驗(yàn)室培育細(xì)胞如何無菌操作？

實(shí)驗(yàn)室前期的準(zhǔn)備工作一定要到位，先估計此次試驗(yàn)過程中會使用到那些設(shè)備或者儀器，避免因估計不足、準(zhǔn)備不充分而導(dǎo)致試驗(yàn)不能繼續(xù)完整下去。

1. 無菌操作辦公地區(qū)范圍應(yīng)維持保潔及寬闊，*東西，例如玻璃管架、吸管、汲取器或吸管盒等可以短時間之內(nèi)安放，其他實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70  ethanol 揩拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺面的中央無菌地區(qū)范圍，勿在邊緣的非無菌地區(qū)范圍培養(yǎng)箱KLYQ操作。

2. 實(shí)驗(yàn)施行前，無菌室及無菌操作臺（laminar flow） 以紫外燈映射30-60 分鐘滅菌，以70  ethanol 揩拭無菌操作臺面，并開啟無菌操作颶風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才著手實(shí)驗(yàn)操作。每每操作只處置一株細(xì)胞株，且縱然營養(yǎng)物質(zhì)相同亦不共享營養(yǎng)物質(zhì)，以防止差錯淆惑或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完結(jié)后，將實(shí)驗(yàn)東西帶出辦公臺，以70  ethanol 揩拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，運(yùn)用霉菌培養(yǎng)箱或二氧化碳培養(yǎng)箱再施行下一個細(xì)胞株的操作。

3. 謹(jǐn)慎取用無菌的實(shí)驗(yàn)東西，防止導(dǎo)致污染。勿碰觸吸管尖頭部或器皿瓶口，亦不要在敞開的器皿正上方操作實(shí)驗(yàn)。器皿敞開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾側(cè)約45° 角取用，盡力勿將瓶蓋蓋口朝上安放桌面兒。

4. 辦公擔(dān)任職務(wù)的人應(yīng)注意自身的安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套兒后才施行實(shí)驗(yàn)。對于來自人的總稱或是病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)尤其謹(jǐn)慎操作，并挑選合適等級的無菌操作臺（至少Class II）。操作過程中，應(yīng)防止引動aerosol 的萌生，謹(jǐn)慎毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并防止尖銳針頭的損害等。

5. 定期檢驗(yàn)測定下面所開列項(xiàng)目：

a. CO2 鋼瓶的CO2 壓力

b.  二氧化碳培養(yǎng)箱的CO2 液體濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周改易）。

c. 無菌操作臺內(nèi)的airflow 壓力，定期改易太陽燈管及HEPA 過淋膜，預(yù)濾網(wǎng)（300鐘頭/預(yù)濾網(wǎng)，3000 鐘頭/HEPA）。