植物原花青素（OPC）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：UPLC-W-A508 

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：60%乙醇，自備，4℃保存。

試劑一：11%鹽酸 8mL，自備,4℃保存。即 2.4mL 鹽酸溶于 5.6mL 蒸餾水試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 8mL 提取液溶解。

工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照 1:1 混合。標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支， 10mg 原花青素。

產(chǎn)品說(shuō)明：

原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物， 廣泛存在于植物的各種器官中，具有ji qiang的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，化妝品，保健品行業(yè)。

在酸性條件下，植物原花青素 A 環(huán)上的間苯二酚和jian ben san fen與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物，在 500nm 處有特征吸收峰，測(cè)定 500nm 光吸收值，可計(jì)算植物中原花青素的含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水、11%鹽酸和

60%乙醇。

操作步驟：

一、OPC 提取:

將樣本烘干至恒重，粉碎，過(guò) 40 目篩之后，稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液，用超聲提取法進(jìn)行提取，超聲功率 300W，破碎 5s，間歇 8s，提取，30min， 12000rpm，25℃，離心 10min，取上清，用提取液定容至 1mL，待測(cè)。

二、測(cè)定操作表:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 用提取液將原花青素配制成 10mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液，用提取液梯度稀釋為 5、2.5、1.25、0.625、0.3125、

0.156、0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、 操作表

三、OPC 計(jì)算公式:

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以?A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程 y=kx+b。2、 OPC 的計(jì)算

將?A 測(cè)定帶入方程，得到 x（mg/mL）

（1） 按樣本鮮重計(jì)算

OPC 含量（mg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W。

（2） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

OPC 含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷（Cpr×V 提?。?/span>= x÷Cpr

V 提取：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用，4℃保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。

2、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.006-1.2 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。