內(nèi)氏放線菌的培養(yǎng)條件與傳代方法及注意事項(xiàng)！

內(nèi)氏放線菌形態(tài)微白堅(jiān)實(shí)的菌落：微菌落顆粒狀，密致，帶放射狀有分枝的菌絲，偶見(jiàn)整齊顆粒狀半球形菌落；大菌落直徑達(dá)2毫米，光滑白色，凸面至臍狀菌落見(jiàn)，表面不規(guī)則的凹陷菌落較少。細(xì)胞為陽(yáng)性或陰性桿菌，直徑和長(zhǎng)度不一。

一、菌種簡(jiǎn)介

平臺(tái)編號(hào)：Bio-134610

規(guī)格：凍干物

拉丁屬名：Actinomyces Naeslundii

菌株名稱：內(nèi)氏放線菌

培養(yǎng)基特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化鈉：5.0，瓊脂：10.0，pH：7.3±0.2（25℃）

生長(zhǎng)條件：37℃；24-48h；5%CO2

存儲(chǔ)條件：2-8℃

安全等級(jí)：2

形態(tài)菌落：直徑為1-2mm，圓形，邊緣整齊，不透明，正面白色，反面白色，中間凸起，表面光滑，表面明亮，質(zhì)地濕潤(rùn)，質(zhì)地黏稠，G＋（藍(lán)紫色），純度：純，桿菌

模式菌株：no

來(lái)源編號(hào)：ATCC 19039

用途：研究

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）

二、培養(yǎng)基

哥倫比亞血平板（建議購(gòu)買市面上成品培養(yǎng)基）

三、傳代方法

①準(zhǔn)備1支含有5~10mL液體培養(yǎng)基的試管和2個(gè)平板；②安全柜中打開(kāi)，用酒精燈灼燒頂部，后迅速滴上無(wú)菌水使之破裂，隨后用鑷子將其敲碎；③吸取0.5mL液體培養(yǎng)基打入凍干管，充分溶解后重新打回液體試管中，混勻；④吸取0.2mL菌懸液打入平板中，涂布均勻，重復(fù)兩次獲得兩個(gè)平板；⑤將液體試管和平板全部置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，菌種長(zhǎng)出即可使用。

四、保藏條件

斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請(qǐng)放-20°C 保存。甘油請(qǐng)置于-80°C。

五、注意事項(xiàng)

1）準(zhǔn)備 1 支含有 5-10ml 的液體培養(yǎng)基的試管和 2 個(gè)平板；生物安全柜打開(kāi)，用酒精燈灼燒頂部，后迅速滴上無(wú)菌水使之破裂，隨后用鑷子使其敲碎；吸取 0.5ml 液體培養(yǎng)基打入凍干管，充分溶解后重新打回液體試管中，混勻；吸取 0.2ml 菌懸液打入平板中，涂布均勻重復(fù)獲得兩個(gè)平板；將液體試管和平板全部置于要求的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。

2）經(jīng)過(guò)冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；

3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；

4）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；

5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；

6）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。

7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請(qǐng)?jiān)谑盏骄N后 2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；

8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。

9）安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。

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