如何判斷TrypLE Express酶的消化效果？

顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)：在酶消化過程中及終止消化后，將培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡下觀察，是判斷消化效果最直觀的方法。若細(xì)胞貼壁緊密時(shí)，呈多邊形或不規(guī)則形狀，相互連接成片。隨著消化進(jìn)行，理想的消化效果表現(xiàn)為細(xì)胞逐漸變圓，從培養(yǎng)皿表面松動(dòng)，部分細(xì)胞開始懸浮。若細(xì)胞過度消化，會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞膜破裂、細(xì)胞碎片增多的現(xiàn)象；若消化不足，則細(xì)胞仍大量貼壁，僅有少量細(xì)胞變圓。通過觀察細(xì)胞形態(tài)變化，可及時(shí)判斷消化程度，并調(diào)整消化時(shí)間 。例如，觀察 HeLa 細(xì)胞消化情況時(shí)，當(dāng)約 80% - 90% 的細(xì)胞變圓，且輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿有細(xì)胞開始脫離時(shí)，說明消化效果較好；若大部分細(xì)胞仍緊密貼壁，表明消化時(shí)間不足；若視野中出現(xiàn)大量破碎的細(xì)胞殘片，則意味著過度消化。

檢測(cè)細(xì)胞活力：細(xì)胞活力是衡量消化效果的關(guān)鍵指標(biāo)，直接關(guān)系到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗。常用的檢測(cè)方法如臺(tái)盼藍(lán)染色法，活細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整，能排斥臺(tái)盼藍(lán)而不被染色，死細(xì)胞則因細(xì)胞膜通透性增加，被染成藍(lán)色。通過計(jì)數(shù)染色細(xì)胞與未染色細(xì)胞的比例，可計(jì)算細(xì)胞活力。正常情況下，經(jīng) TrypLE Express 酶合理消化后的細(xì)胞，活力應(yīng)保持在 90% 以上。此外，還可采用 CCK - 8、MTT 等方法檢測(cè)細(xì)胞代謝活性，間接反映細(xì)胞活力。若消化過程對(duì)細(xì)胞造成較大損傷，細(xì)胞活力會(huì)顯著下降，影響后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、分化等實(shí)驗(yàn) 。

評(píng)估細(xì)胞回收率：細(xì)胞回收率反映了消化過程中細(xì)胞的損失程度。在消化完成后，收集所有細(xì)胞懸液，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)（如使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀）計(jì)算回收的細(xì)胞數(shù)量，并與消化前的細(xì)胞數(shù)量對(duì)比，得出細(xì)胞回收率。一般來說，較高的細(xì)胞回收率意味著消化過程對(duì)細(xì)胞的損傷較小，消化效果良好。若細(xì)胞回收率過低，可能是消化時(shí)間過長(zhǎng)、酶濃度過高導(dǎo)致細(xì)胞損傷，或是消化不充分，部分細(xì)胞未能從培養(yǎng)表面有效解離 。

觀察細(xì)胞再貼壁及生長(zhǎng)情況：將消化后的細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)器皿中，觀察細(xì)胞的再貼壁及后續(xù)生長(zhǎng)情況，也是判斷消化效果的重要依據(jù)。消化效果好的細(xì)胞，在接種后 2 - 4 小時(shí)內(nèi)開始貼壁，24 小時(shí)后細(xì)胞基本貼壁，并呈現(xiàn)出正常的生長(zhǎng)形態(tài)，開始增殖。若細(xì)胞貼壁緩慢，或貼壁后形態(tài)異常、生長(zhǎng)緩慢，甚至出現(xiàn)大量死亡，說明消化過程可能對(duì)細(xì)胞造成了不良影響，導(dǎo)致細(xì)胞功能受損，影響其正常的生長(zhǎng)和增殖能力 。

分析細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)：對(duì)于一些對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物要求較高的實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞分選、免疫細(xì)胞研究等，可通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況來判斷消化效果。TrypLE Express 酶若消化過度，可能會(huì)破壞細(xì)胞表面抗原決定簇，導(dǎo)致標(biāo)志物表達(dá)降低或丟失。通過對(duì)比消化前后細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平，若標(biāo)志物表達(dá)無明顯變化，表明消化過程未對(duì)細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重破壞，消化效果良好；反之，則說明消化條件可能需要優(yōu)化 。