吸光度分析和熒光分析是兩種不同但互補(bǔ)的技術(shù),用于檢測和定量樣品中的目標(biāo)分析物。測量特定波長的紫外光和可見光 (UV-Vis) 的吸光度是定量生物分子的成熟方法之一。同時(shí),熒光分析長期以來一直用于測量熒光團(tuán)與波長激發(fā)的樣品結(jié)合的發(fā)射光譜,以進(jìn)行高度特異性的分子定量。
1. 靈敏度
吸光度和熒光分析在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中通常用于測量小體積樣品。微量分光光度計(jì)能夠檢測 1 μL 樣品中低至 0.75 ng/μl 的雙鏈 DNA。使用 DeNovix 高靈敏度檢測試劑盒進(jìn)行熒光分析可產(chǎn)生皮克 (pg) 級(jí)靈敏度,可實(shí)現(xiàn)低至 0.005 ng/μl 的檢測。
2. 動(dòng)態(tài)范圍的差異
測量的動(dòng)態(tài)范圍也是比較方法的一個(gè)考慮因素。就測量范圍的寬度而言,吸光度優(yōu)于熒光分析。以 dsDNA 為例,熒光定量試劑盒廣泛的檢測范圍可達(dá) 4000 ng/μl,而微量分光光度計(jì)中的上限目前為 37500 ng/μl。
3. 檢測要求
吸光度分光光度計(jì)直接測量樣品吸收的特定波長的量,無需稀釋或分析制備。相比之下,熒光分析需要將目標(biāo)樣品與檢測試劑盒中的熒光試劑結(jié)合。還必須將樣品與已知濃度的類似樣品進(jìn)行比較。因此,在進(jìn)行熒光定量分析時(shí),有必要準(zhǔn)備和測量標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 污染檢測
雖然熒光的特異性有利于評(píng)估目標(biāo)分析物的濃度,但所得數(shù)據(jù)無法深入了解樣品中的任何污染。相比之下,可以通過在一系列波長范圍內(nèi)進(jìn)行吸光度光譜測量來推斷出許多不同的污染物。評(píng)估 260/280 nm 和 260/230 nm 等比率可提供有價(jià)值的信息,并且可以作為樣品質(zhì)量控制制度的一部分實(shí)施。
使用 DeNovix 進(jìn)行吸光度和熒光分析
DeNovix 認(rèn)識(shí)到將吸光度和熒光分析結(jié)合到一個(gè)綜合設(shè)備中的好處,使科學(xué)家能夠利用每種方法的優(yōu)勢。我們的 DS-11 系列將市場上靈敏的超微量紫外-可見分光光度計(jì)與集成熒光計(jì)相結(jié)合。這提供了寬動(dòng)態(tài)范圍和更高的靈敏度,以及特異性分析物定量和污染物檢測。
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