人B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)條件與方法及保存與應(yīng)用！

細(xì)胞簡(jiǎn)介

平臺(tái)編號(hào)：Bio-132213

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞信息：WIL2-S

細(xì)胞名稱(chēng)：(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)：懸浮生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

細(xì)胞數(shù)量：1×106個(gè)細(xì)胞數(shù)

細(xì)胞特性：不分泌免疫球蛋白HAT敏感

細(xì)胞純度：94％

細(xì)胞活力：90％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

細(xì)胞凍存：液氮凍存（基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）

細(xì)胞運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸（1Vial）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25flasks）

細(xì)胞用途：只可用于科研不可用于臨床診斷和治療

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）

(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)條件：

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640培養(yǎng)基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗+800ng/ml Taxol

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣 95%，CO2 5%

(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法：

收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)（達(dá)80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：

a，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。

b，向瓶?jī)?nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

c，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

d，傳代比例：1:2-1:3

溫馨提示：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是加入*高藥物濃度的，為800ng/ml。我們采取緩慢增加藥物的梯度的方法。具體步驟是，首先加含200ng/mlTaxol藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間會(huì)有小部分細(xì)胞懸浮起來(lái)，屬于正常情況，通過(guò)換液可以去掉，等細(xì)胞待長(zhǎng)滿(mǎn)就可以消化傳代了，這時(shí)可以一直用含藥物培養(yǎng)液來(lái)消化培養(yǎng)細(xì)胞，一兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml，兩代后可以將藥物濃度提高至*高水平800ng/ml，含藥物培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒(méi)有問(wèn)題，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里加藥物了。

(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞保存和應(yīng)用：

客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。

(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞復(fù)蘇的原則：

在實(shí)際操作中，凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

如何選購(gòu)上等的(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞？

1）該細(xì)胞只能用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

2）收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

4）用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

5）請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定。

(WIL2-S細(xì)胞)人B淋巴細(xì)胞售后服務(wù)：

1）發(fā)貨時(shí)附：細(xì)胞實(shí)拍圖片兩張、細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明、細(xì)胞操作處理方法、細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題反饋表等。

2）細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)給我們真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們調(diào)查核實(shí)后予免費(fèi)調(diào)換，不收取任何費(fèi)用。

3）如用戶(hù)收到細(xì)胞8-15天之內(nèi)因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染，我公司將以6.5折優(yōu)惠價(jià)重新提供一株原細(xì)胞。

4）如用戶(hù)在16-30天內(nèi)因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染，我公司將以8折優(yōu)惠價(jià)重新提供一株原細(xì)胞。

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買(mǎi)等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢(xún)類(lèi)網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶(hù)來(lái)詢(xún)！