EAE造模解決方案

愛必信憑借專業(yè)的研發(fā)實力和嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，精心打造了高穩(wěn)定性、高重復(fù)性的EAE模型研究全套試劑組合，造模核心試劑優(yōu)勢如下：

? 現(xiàn)貨速發(fā)：百日咳毒素國內(nèi)現(xiàn)貨、高純度（>99%）、高品質(zhì)、高性價比

? 高發(fā)病率：C57BL/6小鼠免疫后10-14天穩(wěn)定發(fā)病（臨床評分2-4分）

? 病理重現(xiàn)性好：明確髓鞘脫失（LFB染色）& Th17細胞浸潤（流式驗證）

? 多維評價體系：支持臨床評分、行為學(xué)、組織病理學(xué)、分子生物學(xué)全維度驗證

1. EAE模型核心試劑

（1）免疫原（抗原）

MOG?????（髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白35-55肽段）

來源：人工合成肽，模擬MS中的自身抗原

濃度：通常使用 150-300 μg/只小鼠（溶于PBS、生理鹽水或CFA中）

（2）佐劑

wan全弗氏佐劑（CFA, Complete Freund’s Adjuvant）

成分：礦物油 + 滅活結(jié)核分枝桿菌（如 Mycobacterium tuberculosis H37Ra，濃度 4-5 mg/mL）

作用：增強免疫應(yīng)答，與MOG?????乳化后使用

（3）免疫增強劑

百日咳毒素（Pertussis Toxin, PTX）

劑量： 200-500 ng/只小鼠（腹腔注射）

注射時間：免疫當(dāng)天（Day 0）及第2天（Day 2）

作用：破壞血腦屏障，促進T細胞浸潤中樞神經(jīng)系統(tǒng)

2. EAE模型誘導(dǎo)方法

（1）實驗準(zhǔn)備

實驗動物：通常選擇6 - 8周齡的雌性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠。

動物數(shù)量：根據(jù)實驗設(shè)計，每組至少需要10只動物以確保統(tǒng)計學(xué)意義。

動物適應(yīng)：將動物在實驗環(huán)境中適應(yīng)1周，保持溫度、濕度和光照條件穩(wěn)定。

試劑準(zhǔn)備：將MOG_35-55肽溶解于生理鹽水中，與等體積的CFA混合乳化，形成均勻的乳劑。

（2）EAE誘導(dǎo)

第0天：

乳劑制備：將300 µg MOG_35-55肽與300 µL CFA混合乳化。

注射：將乳劑分兩次（每側(cè)100 µL）皮下注射于小鼠雙側(cè)腋窩、腹股溝和背部。

PTX注射：腹腔注射200 ng PTX。

第2天：

再次注射PTX：腹腔注射200 ng PTX。

3. EAE模型驗證

EAE模型的驗證需通過臨床評估、行為學(xué)、組織病理學(xué)、分子生物學(xué)等多維度進行，以下是系統(tǒng)的驗證方法分類及操作要點。

（1）臨床評分驗證

①標(biāo)準(zhǔn)化評分系統(tǒng)0-5分量表（很常用）：從第0天開始，連續(xù)觀察30天或更長時間。

評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無癥狀。1分：尾部無力或癱瘓。2分：后肢無力。3分：后肢癱瘓。4分：四肢癱瘓。5分：死亡。

②體重監(jiān)測：EAE小鼠通常伴隨體重下降（>10%提示模型成功），需每日記錄，體重持續(xù)下降可能需倫理干預(yù)。

（2）行為學(xué)檢測

①運動功能評估

轉(zhuǎn)棒實驗（Rotarod）：加速模式（4-40 rpm，5min內(nèi)完成）記錄跌落時間，反映協(xié)調(diào)性與耐力。

步態(tài)分析（CatWalk或足印法）：量化步幅長度、基寬、擺動速度。

②抑郁樣行為檢測

強迫游泳實驗（FST）：記錄不動時間（反映絕望行為）。

懸尾實驗（TST）：輔助驗證抑郁表型。

（3）組織病理學(xué)驗證

①取材與處理

灌注固定：4%多聚甲醛灌注后取脊髓（腰膨大段）和腦組織。

切片制備：石蠟切片（5μm）或冷凍切片（10μm）。

②染色方法

（4）分子生物學(xué)驗證

①流式細胞術(shù)

細胞亞群分析：Th1（CD4+IFN-γ+）、Th17（CD4+IL-17+）、Treg（CD4+FoxP3+）。

樣本來源：脾臟、淋巴結(jié)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)單細胞懸液。

②細胞因子檢測

ELISA/液相芯片：促炎因子：TNF-α、IL-6、IL-17

抗炎因子：IL-10、TGF-β

qPCR：脊髓/腦組織中細胞因子mRNA表達。

③蛋白表達分析

Western Blot：

炎癥通路蛋白：NF-κB p65、pSTAT3

神經(jīng)保護標(biāo)志物：BDNF、NGF

4. 模型成功標(biāo)準(zhǔn)

基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)：發(fā)病率>80%（臨床評分≥2）；病理確認(rèn)HE顯示炎性浸潤+ LFB證實髓鞘脫失。

高級標(biāo)準(zhǔn)：行為學(xué)異常（Rotarod時間↓50%）；分子標(biāo)志物：Th17比例↑2倍，CNS中IL-17水平顯著升高。

5. 常見問題與解決方案

6. 特色應(yīng)用案例

東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)精神病學(xué)研究所附屬中大醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科張志珺教授團隊采用實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)大鼠模型，研究Roflumilast的作用。他們的研究表明Roflumilast有可能成為改善MS抑郁癥狀和急性時相運動障礙的潛在藥物，其抗炎、減炎和抑制小膠質(zhì)細胞激活的特性提示其在MS治療中的潛力。IL6、IL1B和TNF是MS和抑郁癥共有的關(guān)鍵基因，其編碼的細胞因子存在蛋白質(zhì)相互作用。IL-6可能在多發(fā)性硬化癥相關(guān)抑郁中發(fā)揮重要作用，IL-6拮抗劑可能成為改善多發(fā)性硬化癥抑郁的潛在治療策略。研究結(jié)果為進一步闡明MS和抑郁癥的發(fā)病機制提供了重要線索^[1]。

參考文獻：

[1] Wang Z, Zhang Y, Chai J, Wu Y, Zhang W, Zhang Z. Roflumilast: Modulating neuroinflammation and improving motor function and depressive symptoms in multiple sclerosis[J]. J Affect Disord. 2024;350:761-773. doi:10.1016/j.jad.2023.12.074

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