高效液相色譜儀(HPLC)使用維護(hù)全攻略

高效液相色譜儀(HPLC)作為現(xiàn)代分析實(shí)驗(yàn)室的核心設(shè)備，其穩(wěn)定運(yùn)行對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。本文將系統(tǒng)介紹HPLC的操作規(guī)范、日常維護(hù)要點(diǎn)及常見(jiàn)故障處理方法，幫助實(shí)驗(yàn)人員延長(zhǎng)儀器壽命，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

規(guī)范操作流程

開(kāi)機(jī)準(zhǔn)備是HPLC分析的第一步關(guān)鍵環(huán)節(jié)。流動(dòng)相必須使用HPLC級(jí)溶劑，并通過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣10-20分鐘以去除溶解氣體。安裝色譜柱時(shí)需注意流向標(biāo)識(shí)，新柱應(yīng)先用低流速(0.2-0.5mL/min)平衡，避免突然加壓損壞柱床。

分析方法建立時(shí)，初始流速不宜過(guò)高，建議從1.0mL/min開(kāi)始逐步提升。對(duì)于含緩沖鹽的流動(dòng)相，需特別注意pH范圍(通常2-8)，超出范圍會(huì)損傷硅膠基質(zhì)色譜柱。梯度洗脫結(jié)束后，應(yīng)用初始比例流動(dòng)相沖洗色譜柱至少30分鐘，使系統(tǒng)重新平衡。

關(guān)機(jī)程序同樣重要。先降低流速至0.1mL/min，依次關(guān)閉檢測(cè)器、柱溫箱和泵。若使用緩沖鹽流動(dòng)相，必須先用5-10倍柱體積的水沖洗，再用有機(jī)相(如甲醇)沖洗保存。長(zhǎng)期不用時(shí)，色譜柱應(yīng)充滿保存溶劑(反相柱用甲醇，正相柱用正己烷等)，兩端密封。

日常維護(hù)要點(diǎn)

流動(dòng)相管理直接影響基線穩(wěn)定性。水相流動(dòng)相建議現(xiàn)配現(xiàn)用，存放不超過(guò)2天，防止微生物滋生。溶劑瓶吸濾頭每月應(yīng)拆下超聲清洗(10%硝酸10分鐘，純水沖洗)。在線脫氣機(jī)需定期檢查膜管狀態(tài)，出現(xiàn)變色或破損及時(shí)更換。

泵系統(tǒng)維護(hù)重點(diǎn)關(guān)注密封圈和單向閥。建議每3-6個(gè)月更換泵密封圈，當(dāng)壓力波動(dòng)>5%時(shí)應(yīng)檢查單向閥。清洗單向閥時(shí)需注意安裝方向，用甲醇超聲10分鐘后純水沖洗。帶seal-wash功能的儀器要定期補(bǔ)充清洗液(90%水+10%異丙醇)。

進(jìn)樣系統(tǒng)是交叉污染的高發(fā)區(qū)域。自動(dòng)進(jìn)樣器針頭和針座建議每年更換，出現(xiàn)彎曲、毛刺或堵塞時(shí)立即更換。六通閥轉(zhuǎn)子密封墊同樣需年度更換，磨損會(huì)導(dǎo)致峰形拖尾和殘留。手動(dòng)進(jìn)樣器使用后應(yīng)用純水-甲醇交替沖洗裝載和進(jìn)樣位置各3-4mL。

檢測(cè)器維護(hù)主要針對(duì)流通池?；€噪聲突然增大可能是流通池污染，可拆下用甲醇超聲清洗，注意勿刮傷石英窗。UV檢測(cè)器氘燈壽命約1000小時(shí)，強(qiáng)度低于50%時(shí)應(yīng)考慮更換。

常見(jiàn)故障處理

壓力異常是最常見(jiàn)問(wèn)題。壓力持續(xù)升高通常由堵塞引起，應(yīng)按保護(hù)柱→在線過(guò)濾器→柱前篩板→色譜柱的順序排查。壓力波動(dòng)多因泵內(nèi)有氣泡或單向閥故障，可通過(guò)大流量沖洗(3-4mL/min甲醇)或超聲清洗單向閥解決。

漏液故障需根據(jù)位置處理。接頭處漏液先檢查是否擰緊，仍漏則更換密封墊。泵頭漏液多因密封圈磨損，應(yīng)停機(jī)更換。檢測(cè)器漏液常見(jiàn)于流通池窗口墊片老化，需使用專(zhuān)用工具更換。

色譜峰異常原因多樣。鬼峰可能來(lái)自樣品污染或進(jìn)樣系統(tǒng)殘留，應(yīng)沖洗系統(tǒng)并檢查轉(zhuǎn)子密封墊。峰分叉多因色譜柱性能下降或保護(hù)柱失效，可更換保護(hù)柱或反向沖洗色譜柱。保留時(shí)間漂移需檢查柱溫穩(wěn)定性(±0.5℃內(nèi))和流動(dòng)相組成。

通過(guò)規(guī)范的日常操作、定期維護(hù)和及時(shí)故障排查，可顯著提高HPLC的穩(wěn)定性和使用壽命。建議實(shí)驗(yàn)室建立詳細(xì)的儀器使用和維護(hù)日志，記錄耗材更換日期、故障現(xiàn)象及處理措施，為后續(xù)維護(hù)提供參考。