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大鼠肝臟星形細(xì)胞靜息表型維持與活化誘導(dǎo)的精準(zhǔn)調(diào)控策略
一、靜息表型維持策略
低血清培養(yǎng)條件
采用含0.5%-2%胎牛血清的培養(yǎng)基，可顯著抑制細(xì)胞活化標(biāo)志物α-SMA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，與10%血清組相比，低血清組細(xì)胞活化率降低60%-70%，且脂滴保留更完整。
維生素A代謝干預(yù)
補(bǔ)充視黃醇（10μM）或全反式維甲酸（1μM），可維持細(xì)胞內(nèi)維生素A儲(chǔ)存功能。研究證實(shí)，視黃醇處理組細(xì)胞脂滴數(shù)量較未處理組增加40%，且α-SMA表達(dá)量下降50%。
細(xì)胞外基質(zhì)模擬
在培養(yǎng)皿表面包被層粘連蛋白（5μg/cm²）或膠原IV（2μg/cm²），可模擬肝臟Disse間隙微環(huán)境。此條件下，細(xì)胞伸展面積減少30%，突起數(shù)量降低50%，更接近靜息態(tài)形態(tài)。
抑制性細(xì)胞因子添加
外源性添加HGF（20ng/mL）或BMP-7（50ng/mL），可通過激活Smad7信號(hào)通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的活化。聯(lián)合使用HGF+BMP-7時(shí)，活化抑制率可達(dá)85%。
二、活化誘導(dǎo)策略
促纖維化因子刺激
TGF-β1（5ng/mL）處理24小時(shí)可誘導(dǎo)α-SMA表達(dá)量上升10倍，且細(xì)胞收縮性增強(qiáng)3倍。PDGF-BB（10ng/mL）則通過促進(jìn)細(xì)胞增殖，使活化細(xì)胞數(shù)量增加5-8倍。
機(jī)械應(yīng)力模擬
采用柔性基底拉伸系統(tǒng)（10%應(yīng)變，0.5Hz頻率）處理細(xì)胞，可激活YAP/TAZ通路，導(dǎo)致α-SMA表達(dá)量上升6倍，且細(xì)胞排列方向與應(yīng)力方向一致。
代謝重編程干預(yù)
以葡萄糖（25mM）替代培養(yǎng)基中的丙酮酸，可誘導(dǎo)細(xì)胞從氧化磷酸化轉(zhuǎn)向糖酵解代謝。此條件下，細(xì)胞活化標(biāo)志物表達(dá)量上升3倍，且ECM分泌量增加50%。
三維培養(yǎng)體系構(gòu)建
使用Matrigel（5mg/mL）或膠原凝膠（2mg/mL）進(jìn)行三維培養(yǎng)，可模擬體內(nèi)纖維化微環(huán)境。三維培養(yǎng)組細(xì)胞活化率較二維培養(yǎng)組高40%，且膠原合成能力增強(qiáng)3倍。
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