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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的操作步驟是什么

來(lái)源:杭州柏恒科技有限公司   2025年10月30日 14:04  
實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀是用于熒光測(cè)量的儀器,采用側(cè)邊熒光采集方式,6個(gè)熒光通道同時(shí)采集,5S內(nèi)可完成96個(gè)樣本6個(gè)熒光通道的檢測(cè),大大節(jié)約檢測(cè)時(shí)間。本產(chǎn)品具有強(qiáng)大的軟件及硬件功能,滿足多場(chǎng)景客戶使用需求。
產(chǎn)品特點(diǎn):
熒光信號(hào)強(qiáng)、背景噪聲低,靈敏度高。
5S內(nèi)完成96個(gè)樣本所有熒光通道的檢測(cè)。
采用LED光源設(shè)計(jì),節(jié)能環(huán)保,使用壽命長(zhǎng),免維護(hù)。
自動(dòng)出倉(cāng)功能,可與自動(dòng)化工作站配合使用,工作效率高。
PC端操作,一臺(tái)電腦可控制多臺(tái)儀器,可隨時(shí)運(yùn)行多組實(shí)驗(yàn)。
軟件分析功能強(qiáng)大,可以進(jìn)行定性/定量分析、HRM、基因分型等。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
‌耗材選擇‌:根據(jù)儀器型號(hào)選擇適配的八連管、96孔板或384孔板,需提前確認(rèn)儀器配置‌。
‌試劑準(zhǔn)備‌:將qPCR預(yù)混液、模板DNA、引物、無(wú)酶水等試劑置于冰盒上,并放入生物安全柜中‌。
‌儀器檢查‌:開(kāi)機(jī)后輸入密碼,待自檢完成(指示燈變綠)后啟動(dòng)軟件‌。
反應(yīng)體系配置:
‌混合試劑‌:按說(shuō)明書(shū)計(jì)算用量,將預(yù)混液、無(wú)酶水、引物加入Ep管中,顛倒混勻‌。
‌加樣‌:將混合液加入八連管左側(cè)兩列,模板加入右側(cè),每種濃度設(shè)兩個(gè)平行‌。
‌離心‌:蓋緊管蓋后瞬時(shí)離心,確保溶液混合均勻‌。
儀器上機(jī)操作:
‌裝載樣本‌:彈出儀器托架,將八連管或96孔板放入(八連管需適配器),注意對(duì)稱平衡放置‌。
‌設(shè)置程序‌:
選擇實(shí)驗(yàn)類型(如SYBR Green)‌。
設(shè)置溫度程序(如預(yù)變性95℃ 30s,擴(kuò)增階段95℃ 5s、60℃ 30s,循環(huán)40次)‌。
確認(rèn)熱蓋溫度、反應(yīng)體系體積(如20μL)‌。
‌啟動(dòng)運(yùn)行‌:保存程序后開(kāi)始實(shí)驗(yàn),過(guò)程中勿拉動(dòng)反應(yīng)艙‌。
結(jié)果分析:
‌數(shù)據(jù)采集‌:程序結(jié)束后自動(dòng)生成擴(kuò)增曲線和熔解曲線,需檢查曲線是否平滑、復(fù)孔結(jié)果是否均一‌。
‌閾值調(diào)整‌:若為定性實(shí)驗(yàn)(如病毒檢測(cè)),需設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照,并手動(dòng)調(diào)整閾值以提高準(zhǔn)確性‌。
 
 

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