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特色應(yīng)用|非衍生法結(jié)合 LC-MSMS 分析 21 種氨基酸

來源：島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司 SGLC   2025年10月30日 16:23  
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非衍生法結(jié)合

 LC-MSMS 分析 

21 種氨基酸

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摘要 

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本文建立了21 種氨基酸非衍生法的 LC-MS/MS 測定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生，直接采用 Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離，島津串聯(lián)質(zhì)譜 LCMS-8050 檢測分析，21 種氨基酸保留強(qiáng)，峰型對稱，且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測定提供參考。



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實(shí)驗(yàn)部分

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1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

Shimadzu LC-30AD與LCMS-8050 聯(lián)用系統(tǒng)；

色譜柱:Shim-pack GIST Amide（3 μm，2.1×100 mm；P/N:227-30818-04）；

SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器（P/N:380-00341）；

LC-MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液槍：

Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N:00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N:00-NAR-100） ；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N:00-NAR-1000） ；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N:00-NAR-10000） 。

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1.2 混合對照品溶液的制備

分別稱取 21 種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，加水溶解并稀釋至 1 mg/mL，制成各標(biāo)準(zhǔn)品母液；分別移取各標(biāo)準(zhǔn)品母液適量，加 50%乙腈水稀釋至 50 ng/mL，混勻，備用。

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1.3 分析條件

UHPLC 條件：

色譜柱：Shim-pack GIST Amide（3μm，2.1×100 mm；P/N：227-30818-04）

流速：0.5 mL/min；

進(jìn)樣量：1 μL

柱溫：40 ℃

流動相：A：0.05 %甲酸水溶液

           B：乙腈


梯度洗脫程序如下：

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質(zhì)譜條件：

離子化模式：ESI，正離子掃描； 

掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）

碰撞氣：氬氣 

加熱氣：干燥空氣 10 L/min

霧化氣：氮?dú)?3 L/min 

干燥氣：氮?dú)?10 L/min

接口溫度：300℃ DL 

溫度：150 ℃

加熱模塊溫度：400 ℃


MRM 參數(shù)見下表

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

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21 種氨基酸+γ-氨基丁酸混標(biāo)溶液 MRM 譜圖（濃度：50 ng/mL）

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結(jié)論

本文建立了21 種氨基酸非衍生法的LC-MS/MS 測定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生，直接采用Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離，島津串聯(lián)質(zhì)譜LCMS-8050 檢測分析，21 種氨基酸保留強(qiáng)，峰型對稱，且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測定提供參考。

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