微生物學技術(shù)：細菌抗酸染色法

1、原理與應(yīng)用

結(jié)核分枝桿菌對苯胺染料一般不易著色，若加溫或延長染色時間使其著色后，再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色，經(jīng)此染色后，結(jié)核分枝桿菌及其他分枝桿菌呈紅色，而非抗酸菌和細胞雜質(zhì)等呈藍色。

2、材料

(1)結(jié)核病人痰

(2)抗酸染色液

(3)玻片、片夾、濾紙片、竹簽、空平皿、污物盆。

3、方法

(1)取潔凈的竹簽沾取痰中血絲或膿性痰，在清潔無油脂玻片上涂開。涂抹區(qū)約拇指蓋大。用過的竹簽放到空平皿內(nèi)待高壓滅菌。

(2)涂片自然干燥后，用片夾挾住玻片一端，通過火焰固定。

(3)涂抹面用濾紙片蓋上，然后往濾紙片上滴加石炭酸復紅染液，使濾紙片*被染液浸濕，持玻片在小火上加溫片刻然后離開火焰，此時可見到玻片上冒出蒸氣。待蒸氣消失后再加溫，如此反復3～4次，約5min，加溫時隨時添加染液勿使紙片干涸。

(4)玻片冷卻后，用接種環(huán)挑去濾紙扔到污物盆內(nèi)，流水沖洗玻片。

(5)滴加3%鹽酸酒精脫色，至涂抹均勻部位基本沒有紅色再脫下為止，水洗。

(6)滴加呂氏美藍染液30sec，水洗。

(7)吸干、鏡檢。

4、溶液配制

萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液

(1)石炭酸復紅液：鹼性復紅4g，溶于95%酒精100ml，作成飽和溶液，再取該飽和液10ml與5%石炭酸溶液90ml混勻即成。

(2)3%鹽酸酒精液。

濃鹽酸3ml加入95%酒精97ml中即成。

(3)呂(Loeffer)氏美藍染色液

美藍2g，溶于95%酒精100ml中，作成飽和液。再取該飽和液30ml與0.01%氫氧化鉀水溶液100ml混合均勻即可。