常用的蛋白質(zhì)SUMO化檢測方法

常用的蛋白質(zhì)SUMO化檢測方法檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhìSUMO化是一個重要的翻譯后修飾過程，涉及小型泛素樣修飾蛋白（SUMO）與目標(biāo)dànbáizhì的共價結(jié)合。SUMO化對許多生物過程，如核輸運(yùn)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞周期進(jìn)程和應(yīng)激反應(yīng)等都有重要作用。以下是常用的檢測dànbáizhìSUMO化的方法：

1.Western Blot：

使用特異性的抗SUMO抗體，可以直接檢測dànbáizhì是否經(jīng)過SUMO化修飾。SUMO化通常會導(dǎo)致蛋白分子量的增加，這在電泳分離后可以觀察到。

2.免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP) + Western Blot：

首先利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞裂解液中沉淀下來，然后進(jìn)行Western Blot使用抗SUMO抗體檢測其SUMO化狀態(tài)。

3.親和純化后的質(zhì)譜分析：

通過SUMO結(jié)合位點(diǎn)的親和純化，可以將SUMO化的dànbáizhì從復(fù)雜的樣品中富集，然后使用質(zhì)譜法進(jìn)行鑒定。

4.生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移 (BRET)：

在細(xì)胞內(nèi)檢測SUMO化的動態(tài)過程。通常涉及將熒光蛋白和螢光蛋白標(biāo)簽分別連接到目標(biāo)蛋白和SUMO上，然后通過測量兩者之間的能量轉(zhuǎn)移來檢測它們的互作。

5.共焦熒光顯微鏡：

使用熒光標(biāo)記的SUMO和目標(biāo)蛋白，可以在細(xì)胞內(nèi)直接觀察SUMO化修飾的位置和動態(tài)。

6.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA)：

使用特異性的抗SUMO抗體，可以進(jìn)行SUMO化蛋白的定量分析。

圖1

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