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北京博蕾德生物科技有限公司
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流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板胞漿游離鈣濃度2013/06/13
流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板胞漿游離鈣濃度莊明明，溫奕欣，劉少列，洪曉鵬西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)2005年10月第26卷第5期摘要：目的建立流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無(wú)細(xì)胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測(cè)定靜息和凝血酶激活狀態(tài)下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結(jié)果Fluo3AM標(biāo)記的血小板的平均熒光強(qiáng)度明顯增加。凝血酶使負(fù)載Fluo3AM標(biāo)記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴(lài)和對(duì)\[
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？2013/06/13
培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有zui終定論。
影響ELISA試驗(yàn)效果常見(jiàn)分析,和解決思路2013/06/13
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2.手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）；3
ELISA的精點(diǎn)摘要,不要錯(cuò)過(guò)奧2013/06/13
的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELSIA，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說(shuō)明，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。4.1標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如
免疫熒光制血樣品與視覺(jué)享受2013/06/13
一、原理（一）什么是熒光，簡(jiǎn)單地講，當(dāng)用一定波長(zhǎng)的光（如紫外光）照射某種物質(zhì)時(shí)，經(jīng)過(guò)照射的物質(zhì)在極短時(shí)間內(nèi)即可發(fā)射出一種可見(jiàn)的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產(chǎn)生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發(fā)熒光：在生物的某些組織中，經(jīng)紫外線(xiàn)照射后能直接發(fā)射出熒光的稱(chēng)為自發(fā)熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經(jīng)紫外線(xiàn)照射后，即可發(fā)出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經(jīng)紫外線(xiàn)照射后，并不能發(fā)出熒光，但是當(dāng)它吸收熒光染料后也可以產(chǎn)生熒光，這種稱(chēng)為次生熒光（或間接熒光）。如吖啶橙，DAP
免疫組化實(shí)驗(yàn)的小竅門(mén)2013/06/13
1．固定：用4%的多聚甲醛固定液。對(duì)于冰凍切片，甲醛固定有時(shí)比冰凍丙酮好；但對(duì)于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時(shí)候商品化的抗體會(huì)有比較適合而推薦的固定液，請(qǐng)于購(gòu)置前注意說(shuō)明書(shū)。BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對(duì)組織的穿透力較強(qiáng)，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對(duì)抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標(biāo)本的長(zhǎng)期保存。PLP液：即高碘酸鈉-賴(lài)氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類(lèi)組織，對(duì)超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。2．組織脫水，
酶聯(lián)方法的標(biāo)本收集與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備2013/06/13
臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標(biāo)本的收集A、血液標(biāo)本有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無(wú)法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無(wú)凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對(duì)燒傷
ELISA 方法的實(shí)驗(yàn)原理和操作過(guò)程.2013/06/13
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，
動(dòng)植物樣品的采集及DNA樣品的提取2013/06/13
動(dòng)物樣品的采集及處理方法遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動(dòng)物和圈養(yǎng)動(dòng)物的保護(hù)和管理中變得日益重要。在本文中，我們總結(jié)了一些能簡(jiǎn)便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。我們?cè)诓杉瘶悠分?，?duì)將要進(jìn)行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，當(dāng)采集地與實(shí)驗(yàn)室有相當(dāng)距離時(shí)，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地，這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗(yàn)。首先，所有樣品均應(yīng)以個(gè)體序號(hào)進(jìn)行標(biāo)注，并且應(yīng)寫(xiě)上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期，越詳盡越好，以便同一個(gè)體的不同類(lèi)數(shù)據(jù)可以相互引用，另外，地理來(lái)源的標(biāo)注也很重要，需
實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞目錄名詞大全2013/06/13
3T3swissSwiss小鼠胚胎成纖維細(xì)胞A549人肺癌細(xì)胞（能產(chǎn)生Keratin）CHOdhfr二氫葉酸缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞CHO-K1中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞Cyc-tAg小鼠T淋巴細(xì)胞瘤（SV40T抗原轉(zhuǎn)染）DU145人前列腺癌細(xì)胞FDC-P1小鼠正常骨髓細(xì)胞GH3大鼠垂體瘤細(xì)胞GT1.1人垂體瘤細(xì)胞（分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素）HEK-293人胚腎細(xì)胞Hela人宮頸癌細(xì)胞MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細(xì)胞MCF7人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435s人乳腺癌細(xì)胞MDA-
質(zhì)粒提取簡(jiǎn)介及問(wèn)題分析2013/06/13
一、導(dǎo)論質(zhì)粒提取的原理:轉(zhuǎn)自復(fù)旦大學(xué)一位老師的帖子，后面是方法介紹堿裂解法從大腸桿菌制備質(zhì)粒，是從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室每天都要用的常規(guī)技術(shù)?？墒俏沂昭芯可畮啄炅?，幾乎毫無(wú)例外的是我那些給人感覺(jué)什么都知道的學(xué)生卻對(duì)堿法質(zhì)粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因?yàn)椤斗肿涌寺　防锩嬷恢v實(shí)驗(yàn)操作步驟，而沒(méi)有對(duì)原理進(jìn)行詳細(xì)的論述。這是導(dǎo)致我的學(xué)生誤入歧途的主要原因。后來(lái)我發(fā)現(xiàn)其實(shí)是整個(gè)中國(guó)的相關(guān)領(lǐng)域的研究生水平都差不多，甚至有很多“老師”也是這個(gè)狀態(tài)。這就不得不讓人感到悲哀了。我想這恐怕和我們的
常用熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)2013/06/13
FluorescentDye（熒光染料）Excitation（激發(fā)波長(zhǎng)，nm）Emission（發(fā)射波長(zhǎng)，nm）Cy2489506GFP（RedShifted）488507YO-PRO-1491509YOYO-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen?500503522OregonGreen?488496524RlboGreen?5005
DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白2013/06/13
（一）原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點(diǎn)為PH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。在PH7.2～7.4的環(huán)境中，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過(guò)柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是離子交換層析的一種。
淋巴細(xì)胞雜交瘤單克隆抗體技術(shù)2013/06/13
1975年，Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無(wú)限增殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)上的突破不僅為醫(yī)學(xué)與生物學(xué)基礎(chǔ)研究開(kāi)創(chuàng)了新紀(jì)元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。制備單克隆抗體包括動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、選擇雜交瘤、檢測(cè)抗體、雜交瘤細(xì)胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產(chǎn)，要經(jīng)過(guò)幾個(gè)月的一系列實(shí)驗(yàn)步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞融合前準(zhǔn)備細(xì)胞融合，選擇雜交瘤抗
免疫血清的制備2013/06/13
撰稿李恩善免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。價(jià)、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑（如用于制備免疫標(biāo)記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價(jià)高低取決于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體，常可獲得價(jià)的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時(shí)，則需同時(shí)加用佐劑以增強(qiáng)抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時(shí)間間隔等，也是影響免疫
薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的免疫組化研究2013/06/13
薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究張承英朱世樂(lè)章友康鄭欣鄂潔侯平薄基底膜腎?。═BMN）是以持續(xù)性鏡下血尿?yàn)橹饕憩F(xiàn)的一種遺傳性腎病，腎小球基底膜（GBM）彌漫性變薄為該病惟一重要的病理學(xué)特征。既往關(guān)于Alport綜合征（Alportsyndrome,AS），另外一種以持續(xù)性鏡下血尿,GBM變薄增厚、撕裂、分層為特征的遺傳性腎病，Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究較多，眾多研究表明,AS患者腎小球基底膜Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈表達(dá)缺陷［1］,而關(guān)于薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的研究甚少。本
聯(lián)合檢測(cè)血清和腹水IL-6、IL-2、TNF-α對(duì)肝硬化合并SBP的診斷價(jià)值2013/06/13
趙彩彥劉金星王淑琴甄真周俊英采用ABS-ELISA法（藥盒由比利時(shí)Innogentics公司提供）和雙抗體夾心ELISA法（藥盒由法國(guó)Immunotech公司或軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供）對(duì)46例肝炎肝硬化進(jìn)行了血清和腹水中IL-6、IL-2、TNF-α的測(cè)定。與正常對(duì)照組比較，肝炎肝硬化患者血清和腹水IL-6、TNF-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低。合并自發(fā)性腹膜炎（SBP）患者血清IL-6、TNF-α水平為（33.19±12.31）ng/L,（11.73±4.21）μg/L,腹水為（1420±
白細(xì)胞介素-2的研究進(jìn)展及應(yīng)用2013/06/13
隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，運(yùn)用重組表達(dá)技術(shù)來(lái)生產(chǎn)預(yù)防和治療疾病的制品已成為近幾年研究的熱點(diǎn)。白細(xì)胞介素-2是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，它能夠有效地提高免疫功能，醫(yī)學(xué)上已用于預(yù)防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病，如腫瘤等；在獸醫(yī)方面因其能提高疫苗的免疫效果，尤其是在基因工程亞單位苗的免疫效果而倍受重視，展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。一、白細(xì)胞介素-2的受體及其生物學(xué)功能：白細(xì)胞介素-2（IL-2）是一種zui早發(fā)現(xiàn)的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，在1979年第二屆淋巴因子會(huì)議上正式命名
先天愚型產(chǎn)前篩查的原理？2013/06/13
經(jīng)過(guò)近20年的產(chǎn)前診斷經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)染色體異常的胎兒檢出率并不理想，如羊水細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果只有2-3%，孕早期的絨毛細(xì)胞檢查發(fā)現(xiàn)異常率為7.5-10%左右。這說(shuō)明原有高危人群的定義范圍還有待改進(jìn)。例如目前產(chǎn)前診斷適應(yīng)仍以高齡孕婦占絕大多數(shù)，國(guó)外為80-90%，國(guó)內(nèi)高齡者較少，但在產(chǎn)前診斷中也占1/3左右。而先天愚型兒中只有20%是由高齡孕婦所生。因此如何從普通人群中，特別是年紀(jì)小于35歲的人群中篩選出高危者的問(wèn)題已經(jīng)引起許多學(xué)者的關(guān)注，并進(jìn)行了有關(guān)研究。近年來(lái)已有不少?lài)?guó)家采用在孕中期（懷孕15-20周）
為什么選擇ELISPOT?2013/06/13
ELISPOT斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析使細(xì)胞因子分泌過(guò)程更加形象。因?yàn)榧?xì)胞因子圍繞在細(xì)胞周?chē)?，在被上清液稀釋之前，?huì)和鄰近細(xì)胞表面的受體結(jié)合，或者降解。細(xì)胞因子和GranzemyBELISPOT實(shí)驗(yàn)是zui有效的體外監(jiān)控CD4或CD8T細(xì)胞抗原的方法。通過(guò)測(cè)定單個(gè)細(xì)胞因子信號(hào)及其頻率，可以建立具有不同集落大小的特殊T細(xì)胞庫(kù)。ELISPOT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞因子的*優(yōu)勢(shì)☆從1到10，000，000，可以測(cè)量體外細(xì)胞因子的分泌頻率，和ELISA以及四聚體染色、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色相比，具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)。
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