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拓赫機電科技（上海）有限公司
中級會員 | 第14年
高通量組織研磨儀對動物器官組織的研磨2016/09/19
實驗步驟每50～100mg組織加入0.2體積TRIzol1.加鋼珠1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù)：12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿2.將上述勻漿液每0.2體積TRIzol試劑用量的勻漿液中加入0.04體積，蓋緊管蓋，手動劇烈震搖15秒鐘，然后室溫靜置2～3分鐘。3.4℃10,000g離心10分鐘。4.小心吸取上層水相（無色）加入到新試管中，同時計算所吸取的水相體積。不用過多吸取，防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)（中間層，白色）。5.加入所吸取水相等體積預(yù)冷的異丙醇，蓋緊管蓋，輕輕搖勻。6.室溫靜置10
提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA2016/09/19
提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA實驗?zāi)康难心テ扑檐浌墙M織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），提取其總RNA。實驗原理充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），再用相關(guān)試劑提取其總RNA。實驗材料和器具樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）耗材：研磨罐（上海凈信，***ml），研磨珠（上海凈信，***mm，***顆）試劑：液氮若干實驗步驟1.研磨軟骨組織1.1取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織，剪切成約***立方厘米小塊；1.2將小塊軟骨組織置于液氮中***分鐘或放入***度冰箱冷凍30
ibidi血管生成、侵襲等實驗現(xiàn)象2016/08/24
卡西波肉瘤是一種發(fā)生在包括口腔在內(nèi)的多種組織內(nèi)的，具有*的血管生成能力和侵襲能力的惡性腫瘤?？ㄎ鞑ㄈ饬鯧S已經(jīng)被鑒定出多種細(xì)胞標(biāo)記物，但是其來源依然是一個迷。美國的科學(xué)家之前發(fā)現(xiàn)卡西波肉瘤相關(guān)的皰疹病毒（KSHV）能夠使大鼠的原代間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）感染，變形，并且重新編輯，使其分化為類卡西波肉瘤細(xì)胞。在這次的實驗中，科研人員使用KSHV感染由多種組織來源的人原代間充質(zhì)干細(xì)胞，包括骨髓（MSCbm），脂肪組織（MSCa），牙髓，牙齦組織（GMSC），和乳牙?？蒲腥藛T成功的建立起來KSHV感染
活細(xì)胞成像：ASAP1直接影響細(xì)胞遷移機制2016/08/15
ASAP1調(diào)節(jié)以F-actin為基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)和功能，比如定點粘附性（focaladhesions,FAs）,質(zhì)膜折皺（circulardorsalruffles，CDRs），細(xì)胞伸展和遷移。ASAP1需要N端的BAR基團發(fā)揮作用。美國的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)nonmusclemyosin2A(NM2A)在體外實驗中與ASAP1的BAR-PH串聯(lián)體直接結(jié)合。科學(xué)家用co-IP的方法在細(xì)胞內(nèi)定位了ASAP1和NM2A發(fā)現(xiàn)，如果下調(diào)ASAP1將會減少細(xì)胞內(nèi)NM2A和F-actin，并且會對細(xì)胞遷移，F(xiàn)As，細(xì)胞伸展
傷口愈合實驗2016/07/19
傷口愈合實驗--TARBP2的類泛素化（SUMOylated）調(diào)節(jié)miRNA/siRNA作用小RNA介導(dǎo)的基因沉默對于基因表達轉(zhuǎn)錄前調(diào)節(jié)尤其重要，但是，如何調(diào)節(jié)miRNA/siRNA的作用機理還并未研究清楚。上海交大醫(yī)學(xué)院的科研人員在2015年的NATURECOMMUNICATION上發(fā)的文章中研究調(diào)節(jié)miRNA/siRNA發(fā)揮作用的因子。研究表明，TARBP2的類泛素化（SUMOylated）不會對成熟的的miRNA的產(chǎn)物有左右，但是會影響miRNA/siRNA的效用。其會引入Ago2來形成R
炎癥應(yīng)答和單核細(xì)胞的粘附實驗之環(huán)境模擬2016/07/13
愛爾蘭和瑞典科學(xué)家評估了一種抑制炎癥和平滑肌細(xì)胞增殖的新的藥物洗脫支架的治療效率。在這項研究中，科學(xué)家用CX3CR1作為靶向受體，用于預(yù)防單核細(xì)胞的粘附和炎癥反應(yīng)。使用AZ12201182（AZ1220），一種CX3CR1的拮抗劑，處理單核細(xì)胞；并且在流體狀態(tài)下，將AZ1220處理的單核細(xì)胞的在CX3CR1表面的粘附效率和沒有任何處理單核細(xì)胞的粘附效率進行對比觀測。更進一步，還研究了用AZ1220處理和沒處理的單核細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞表面的粘附效率。Biomaterials.2015Nov;69:22
活細(xì)胞骨架染色：實時觀察3D細(xì)胞培養(yǎng)微環(huán)境與細(xì)胞遷移的互作用2016/07/08
2D細(xì)胞外基質(zhì)（ECMs）的物理特性會影響到細(xì)胞的粘附動態(tài)和形態(tài)，但是3D細(xì)胞外基質(zhì)的局部微環(huán)境對細(xì)胞的影響卻知之甚少。美國的科研人員構(gòu)建了幾種3D膠原基質(zhì)，研究其微結(jié)構(gòu)的變化對于調(diào)節(jié)3D狀態(tài)下的細(xì)胞粘附動態(tài)和細(xì)胞遷移的影響。細(xì)胞外基質(zhì)中有各種成束的纖維會加強局部可粘位點的堅固性，并且可以通過ECM/粘附偶聯(lián)點增強細(xì)胞的粘附穩(wěn)定性，并且高度柔軟的網(wǎng)狀聯(lián)合促進了粘附的收縮力。3D粘附的動力學(xué)由局部的ECM的強度和整合素/ECM還有II型肌球蛋的收縮白共同調(diào)節(jié)。不同于2D遷移，3D的細(xì)胞遷移不僅受E
全內(nèi)反射熒光顯微實驗TIRF實驗2016/07/04
整合素是一種跨膜蛋白，在介導(dǎo)細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）過程中發(fā)揮重要的作用。整合素在和配位體結(jié)合并發(fā)揮作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血細(xì)胞中介入激活整合素這一過程的原理并不十分清晰。美國的科研人員發(fā)現(xiàn)缺少成纖維細(xì)胞，talin或kindlin都不能激活β1整合素，從而不能粘附到纖維粘聯(lián)蛋白表面上；甚至不能由Mn2+介導(dǎo)的整合素粘連構(gòu)象發(fā)生轉(zhuǎn)變。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷細(xì)胞的部分整合素功能，使其活化和粘附在纖維粘連蛋白表面上。而具有方向性
通道載玻片--IL-33免疫熒光染色實驗2016/06/20
細(xì)胞的免疫熒光實驗是一個基礎(chǔ)的細(xì)胞實驗，傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預(yù)先處理好的蓋玻片，待細(xì)胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定，染色等系列工作。為了簡化這一工作，一系列底部適合直接成像的細(xì)胞耗材應(yīng)運而生，如圖：日本的科研人員在研究細(xì)胞因子IL-33在Ca9-22細(xì)胞中免疫熒光染色試驗時使用了一種通道載玻片。IL-33是一種在內(nèi)皮細(xì)胞中常規(guī)表達的細(xì)胞因子，其參與調(diào)節(jié)了先天免疫細(xì)胞的Th2細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。研究人員想研究增強IL-33表達的牙周內(nèi)皮細(xì)胞中牙周菌Porphyromonas
可視的細(xì)胞趨化實驗2016/06/17
細(xì)胞趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動。趨化性對細(xì)胞的發(fā)展和其他正常功能一樣*。在生物材料移植的時候，快速的纖維血管化是成功移植的先決條件之一。尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）和組織型纖溶酶原激活物（tPA）或纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）在纖維蛋白溶解中都發(fā)揮了重要的作用。這三種蛋白近均被報道在無可溶纖維蛋白的細(xì)胞過程中有表現(xiàn)出*的作用，比如細(xì)胞粘附，遷移和增殖。德國的科研人員發(fā)現(xiàn)使用
免疫熒光實驗iPSC-derive神經(jīng)元的體外神經(jīng)毒性檢測2016/06/16
如今神經(jīng)毒性檢測主要是依賴活體動物實驗，不僅有倫理問題，而且通常非常昂貴并且十分耗時。當(dāng)需要大規(guī)模的測試化合物的時候就不太合適了。因此，高通量的體外的神經(jīng)毒性測試就顯得十分必要了，而且可以使用人源的細(xì)胞直接進行試驗，試驗結(jié)果的實用性也更佳。但是，到目前為止，人源干細(xì)胞誘導(dǎo)的神經(jīng)元并沒有適合進行這類試驗的特質(zhì)，試驗時間較長，批次間差異大，并且有收到倫理和一些法律的制約，使得這種細(xì)胞都不太適用于做大規(guī)模的體外測試試驗。近，市面上出現(xiàn)了商用的人源iPSC-derive神經(jīng)元細(xì)胞，重復(fù)性好，可以用來做這
外分泌體含非編碼RNA影響內(nèi)皮細(xì)胞衰老和血管生成2016/06/16
內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮祖細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞的信號在血管形成的時候是至關(guān)重要的。其中，外分泌體就是其中一種通信方式。有研究發(fā)現(xiàn)，外分泌體在免疫應(yīng)答，腫瘤存活，應(yīng)激反應(yīng)和血管生成上的細(xì)胞間通信有著非常重要的作用。在外分泌體中有mRNA和miRNA往往會對受體細(xì)胞產(chǎn)生影響。荷蘭的研究人員對外分泌體內(nèi)的microRNAmiR-214的研究發(fā)現(xiàn)，含有miR-214的外分泌體能夠抑制受體細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞的衰老，并且促進血管生成的發(fā)生。與此同時，其還會抑制毛細(xì)血管失調(diào)癥突變體ataxiaangiectasiamutated
活細(xì)胞骨架染色中的應(yīng)用2016/06/06
Actin-肌動蛋白是細(xì)胞骨架*的一個組成部分，其在很多基礎(chǔ)的細(xì)胞活動中扮演著非常重要的角色。尤其在細(xì)胞形態(tài)，遷移和研究細(xì)胞機制中，肌動蛋白都是一個非常理想的觀測蛋白。肌動蛋白是由小球狀的G-actin聚合成絲狀的F-actin動態(tài)交互變化構(gòu)成的，從而參與了細(xì)胞活動中的各種細(xì)胞骨架的變化。通常研究活細(xì)胞中actin的活動用的是轉(zhuǎn)染actin-GFP融合蛋白的質(zhì)粒，可以同時標(biāo)記F-actin和G-actin，可以有效的反映出細(xì)胞骨架的相對活性，但是當(dāng)值需要觀測F-actin的時候，使用actin-
環(huán)形細(xì)胞侵襲實驗--使細(xì)胞侵襲的過程可視化2016/06/03
腫瘤細(xì)胞的侵襲能力是腫瘤轉(zhuǎn)移的一個重要特征。為了研究腫瘤細(xì)胞侵襲過程的機制，一系列體外細(xì)胞實驗建立起來，用于研究細(xì)胞侵襲基底膜和基質(zhì)的過程。體外侵襲實驗首先是采用人工重構(gòu)基底膜材料Matrigel，可以在37℃逐漸凝固成膠，結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。通常的實驗是在孔徑8μm的濾膜上鋪上一層Matrigel，細(xì)胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過。實驗之后通過對穿過“基質(zhì)膜”的細(xì)胞進行計數(shù)，來確定細(xì)胞的侵襲能力。這一方法非常仿真的模擬了細(xì)胞在生物狀態(tài)下的侵襲過程，但是其也有一
甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTG-1）影響肺癌細(xì)胞血管生成2016/06/03
美國的科研人員通過對TTF-1的調(diào)控發(fā)現(xiàn)，TTF-1能直接調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），并且發(fā)現(xiàn)VEGF啟動子上有多處TTF-1響應(yīng)序列。比如，VEGF的主要受體，VRGFR2顯示出收到TTF-1的直接正調(diào)節(jié)。本文中顯示，低氧并沒有促進TTF-1+肺癌細(xì)胞中的VEGF的表達。而采用外泌體培養(yǎng)基或者是去外泌體的培養(yǎng)基（EDM）時，TTF-1都能促進VEGF表達。但在研究中意外的發(fā)現(xiàn)TTF-1+肺癌細(xì)胞的去外泌體培養(yǎng)基（EDM-TTF-1+）能夠內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成。研究人員采用HUVECs，鋪在
3D細(xì)胞培養(yǎng)--子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞eSCs和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞2016/05/26
Eph和ephrin蛋白在協(xié)調(diào)細(xì)胞、細(xì)胞導(dǎo)向、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用中發(fā)揮著非常重要的作用，與發(fā)展的組織模式和器官和血管生成都有關(guān)系。Eph家族成員在人類腫瘤的發(fā)展過程中有著非常關(guān)鍵功能，在正常的子宮內(nèi)膜的血管化再生組織和人子宮內(nèi)膜具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細(xì)胞（EMSC）有能檢測到Eph家族的蛋白表達，而其他高度血管化的人體器官卻沒有Eph的表達。澳大利亞的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，將EphA3+orEphA3-depletedeSCs和tumour-derivedendothelialcells(TEC
傷口愈合實驗-干細(xì)胞侵襲2016/05/26
傷口愈合實驗是體外研究細(xì)胞遷移的的一個有用的實驗。原理是人為的在鋪板的單層細(xì)胞中制造一個空白的無細(xì)胞的地帶，然后對這個無細(xì)胞地帶的邊緣的細(xì)胞進行觀察；這些邊緣的細(xì)胞會開始進行遷移活動，并且終覆蓋整個無細(xì)胞的區(qū)域，重新互相接觸在一起。法國的科研人員在2015年的STEMCELL上發(fā)的文章中提出神經(jīng)生長因子（NGF）和神經(jīng)生長因子前體（proNGF）會自動的激活乳腺癌干細(xì)胞，并且發(fā)生侵襲。文中，使用乳腺癌細(xì)胞系和腫瘤分離的細(xì)胞進行傷口愈合實驗，得出，由NGF處理的腫瘤離的乳腺癌細(xì)胞的傷口愈合速率有非
細(xì)胞趨化實驗細(xì)胞 對高濃度的IIIA4有負(fù)趨向行為2016/05/24
細(xì)胞趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動。趨化性對細(xì)胞的發(fā)展和其他正常功能一樣*。EphA3在間充質(zhì)細(xì)胞（eMSCs）中發(fā)現(xiàn)表達，但沒有在其他的血管連接組織有表達。澳大利亞的科研人員發(fā)現(xiàn)在人間充質(zhì)細(xì)胞（MSCs）中表達的EphA3能夠在成人血管生成的早期發(fā)揮作用。在研究MSCs細(xì)胞對于血管生成的信號相應(yīng)的實驗中，研究人員使用過表達EphA3的MSCs處于EphA3的一個“興奮劑”IIIA4的一個穩(wěn)
鈣離子成像顯著增強了B細(xì)胞受體介導(dǎo)的Ca2+活動2016/05/23
在生物有機體內(nèi)，鈣離子傳遞了各種各樣的胞內(nèi)信號，這些信號幾乎在每種類型的細(xì)胞中都存在，而且在很多方面都有非常重要的作用。在很多細(xì)胞活動的時候，胞內(nèi)鈣離子的濃度會顯著升高。鈣離子成像是利用鈣離子特異染料，將細(xì)胞中的鈣離子濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來，從而達到檢測細(xì)胞活動的目的。德國的科學(xué)家通過研究B細(xì)胞胞質(zhì)中鈣離子濃度來研究RhoGTPaseRac對于B細(xì)胞功能的重要影響，研究發(fā)現(xiàn)，RacPLCγ2可以通過增強胞漿內(nèi)的Ca2+濃度來影響B(tài)細(xì)胞受體（BCR）發(fā)揮作用。文中，研究人員用BCR和Ca2+分別
細(xì)胞共培養(yǎng)--CD34前體干細(xì)胞對內(nèi)皮細(xì)胞團的旁分泌影響2016/05/17
細(xì)胞共培養(yǎng)實驗是將2種或2種以上的細(xì)胞共同培養(yǎng)在同一環(huán)境中的實驗，更好的模擬體內(nèi)細(xì)胞互相通信的生理情況。一般有兩種共培養(yǎng)方法：1）直接接觸共培養(yǎng)體系：是指直接將2種或2種以上的細(xì)胞按照一定比例混合，鋪在一個孔中；2）間接接觸共培養(yǎng)體系：是指將不同種類的細(xì)胞共用一種培養(yǎng)環(huán)境，而不互相接觸，查看細(xì)胞分泌因子對另外的細(xì)胞的影響。這里我們介紹的是采用間接接觸共培養(yǎng)的方法，研究CD34祖細(xì)胞的分泌物對由內(nèi)皮細(xì)胞組成的細(xì)胞團在血管形成上的影響。文中，研究人員將CD34祖細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞團共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，CD34
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