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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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凍存細(xì)胞時(shí)，還在堅(jiān)持緩凍原則嗎？2021/10/14
一、我們先來說說何為緩凍：緩凍即為凍存細(xì)胞時(shí)，要程序降溫——4℃30min，-20℃1h，-80℃過夜，次日投入液氮內(nèi)。二、那為什么要進(jìn)行緩凍呢？其實(shí)所謂的緩凍是一般使用傳統(tǒng)凍存液凍存過程中需要程序降溫。傳統(tǒng)的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO及基礎(chǔ)培養(yǎng)基等組分組成。凍存保護(hù)的DMSO組分，在進(jìn)入細(xì)胞后結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部的水份，降低冰點(diǎn)，防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶對(duì)細(xì)胞造成損害。但是DMSO只能在細(xì)胞內(nèi)部保護(hù)細(xì)胞，細(xì)胞外部沒有保護(hù)，水結(jié)冰晶會(huì)在細(xì)胞膜外部受到損傷，為了防止冰晶過大，使用時(shí)必須采用程序降
細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢甚至死亡分析與解決！2021/10/14
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來說，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細(xì)胞老化；接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細(xì)胞；調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。二
幾種血涂片染色方法的比較2021/10/14
血涂片染色廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和組織學(xué)教學(xué)片的制作。傳統(tǒng)的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和WrightGiemsa混合法，作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)以簡(jiǎn)單快捷為shou選，而要制作教學(xué)標(biāo)本，則對(duì)染色效果、標(biāo)本存放時(shí)間要求更高，對(duì)此，我們對(duì)各種染色方法進(jìn)行了長(zhǎng)期的探索和比較，以期找到較穩(wěn)定的、效果滿意的染色方法用于制作大批量教學(xué)標(biāo)本。1材料與方法1.1采集標(biāo)本用消毒采血針頭扎刺手指頭或耳垂，滴取黃豆大小血滴于潔凈載玻片上，推成均勻血膜，自然晾干，用甲醇固定2min~5min。大量制作教學(xué)標(biāo)本可一次推出
無處不在的微生物是如何獲得營(yíng)養(yǎng)？2021/10/13
人需要吃飯，動(dòng)物需要捕食，連植物也需要在土壤中汲取營(yíng)養(yǎng)。那么，我們?nèi)庋劭床坏絽s無處不在的微生物如何獲得營(yíng)養(yǎng)呢？微生物不是專用于生物分類學(xué)的名詞，而是指一般需借助顯微鏡才能看清的所有微小生物的統(tǒng)稱，數(shù)量龐大且多樣。微生物中的“微”便是它的特點(diǎn)之一，是人眼不能直接看到的，有些微生物只有粉塵那么大，而有些微生物更小，只有在放大幾千倍以上的情況下才能被看見。微生物也是生物，和人一樣，它的存活也需要汲取營(yíng)養(yǎng)。營(yíng)養(yǎng)是指生物體從外界環(huán)境中獲取生命活動(dòng)所必須的能量和物質(zhì)，來滿足正常生長(zhǎng)和繁殖的需要，它是生物的一
AKTA快速蛋白分離系統(tǒng)與HPLC 的優(yōu)劣比較2021/10/13
HPLC優(yōu)點(diǎn)：高壓速度快分析精度高所需樣本量少，主要用于分析純化多肽類缺點(diǎn)：柱子較貴有些需要用乙氰甲醇等有毒有害試劑不能或只能純化很小量的蛋白AKTA系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)：中低壓容易放大可大規(guī)模純化蛋白類常規(guī)只用無機(jī)鹽類試劑可配備各種介質(zhì)純化不同蛋白可自己灌膠費(fèi)用較少缺點(diǎn)：分析精度沒有HPLC高選用HPLC或AKTA的FPLC主要是依據(jù)你的用途而買，分析用HPLC,大規(guī)模純化用FPLCFPLC供小量（小于explorer)制備用，最大流速只有20ml/min。HPLC基本是用做分析用，也可用做微量制備。AK
原核表達(dá)實(shí)驗(yàn)心得！2021/10/13
人們合成與生物相關(guān)的物質(zhì)是從尿素開始的，1828年，德國(guó)化學(xué)家維勒人工合成了存在于生物體的這種有機(jī)物。在1960年我國(guó)科學(xué)家采用化學(xué)方法shou次成功地合成了具有生物活性的蛋白質(zhì)——胰島素。隨著內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)用各種不同的載體在原核、真核系統(tǒng)中進(jìn)行蛋白表達(dá)更為行之有效。而這其中大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)發(fā)展得最為迅速、成熟。原核表達(dá)具有操作方便、快捷，需時(shí)較短，表達(dá)量大，適合工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。雖然也有缺少糖基化和表達(dá)后加工等問題，當(dāng)有了其它多種表達(dá)系統(tǒng)后，原核系統(tǒng)仍是我們合成外源
分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本規(guī)范，實(shí)驗(yàn)人了解一下！2021/10/12
1.實(shí)驗(yàn)用水分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)應(yīng)使用純水，一般是蒸餾水或去離子水。有的實(shí)驗(yàn)要求用二次蒸餾水或更高規(guī)格的純水(如，電分析化學(xué)、液相色譜等的實(shí)驗(yàn))。純水并非不含雜質(zhì)，只是雜質(zhì)含量極微而已。分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)用水的級(jí)別及主要技術(shù)指標(biāo)，見下表。注：在一級(jí)、二級(jí)純度的水中，難于測(cè)定真實(shí)的pH值，因此，對(duì)其pH值的范圍不作規(guī)定;在一級(jí)水中，難于測(cè)定其可氧化物質(zhì)和蒸發(fā)殘?jiān)?，故也不作?guī)定。(1)蒸餾水通過蒸餾方法、除去水中非揮發(fā)性雜質(zhì)而得到的純水稱為蒸餾水。同是蒸餾所得純水，其中含有的雜質(zhì)種類和含量也不同。用玻璃蒸餾器蒸餾
化學(xué)分析和儀器分析的區(qū)別及特點(diǎn)2021/10/12
化學(xué)分析是指利用化學(xué)反應(yīng)和它的計(jì)量關(guān)系來確定被測(cè)物質(zhì)的組成和含量的一類分析方法。測(cè)定時(shí)需使用化學(xué)試劑、天平和一些玻璃器皿。儀器分析（近代分析法或物理分析法）：是基于與物質(zhì)的物理或物理化學(xué)性質(zhì)而建立起來的分析方法。這類方法通常是測(cè)量光、電、磁、聲、熱等物理量而得到分析結(jié)果，而測(cè)量這些物理量，一般要使用比較復(fù)雜或特殊的儀器設(shè)備，故稱為“儀器分析”。儀器分析除了可用于定性和定量分析外，還可用于結(jié)構(gòu)、價(jià)態(tài)、狀態(tài)分析，微區(qū)和薄層分析，微量及超痕量分析等，是分析化學(xué)發(fā)展的方向。相對(duì)于化學(xué)分析，儀器分析有以下
常用不穩(wěn)定試劑的分類及管理要求2021/10/12
實(shí)驗(yàn)室中不穩(wěn)定的化學(xué)試劑應(yīng)該怎么保存?化學(xué)試劑存放要依據(jù)物質(zhì)自身的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)，降低或杜絕物質(zhì)變性、自然損耗。實(shí)驗(yàn)室中有很多不穩(wěn)定的化學(xué)試劑。有的易揮發(fā)、有的易燃易爆、有的試劑在保存的時(shí)候需要密封保存。常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求(1)與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。如電石(CaC2),生石灰(CaO)，濃硫酸，無水硫酸銅()，各種干燥劑(硅膠，堿石灰，P2O5，CaCl2等)，K,Na,Mg,Na2O2,更要同時(shí)具備所有要求。(2)易與氧氣作用的試劑，如亞硫酸鹽，苯酚，亞
化學(xué)實(shí)驗(yàn)室里污染物的凈化處理工作！2021/10/12
實(shí)驗(yàn)室里面的化學(xué)廢棄物一般分為廢液、無機(jī)廢棄物和有機(jī)廢棄物等三大類。我們應(yīng)該找到這幾種廢棄物，根據(jù)每一類廢棄物的不同特性跟對(duì)環(huán)境的影響，分別使用不同的廢棄物處理辦法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室凈化。在我們對(duì)這些廢棄物進(jìn)行處理前，我們要先找到這些廢棄物并把他們分門歸類，下面我們先介紹實(shí)驗(yàn)室廢棄物收集都有哪些方法：1.第1類是分類收集法，就是根據(jù)廢棄物的不同類別和性質(zhì)分類收集起來。2.第2類是看實(shí)驗(yàn)室里面的廢棄物，哪種zui多.或者濃度zui濃，根據(jù)處理方式的難易進(jìn)行分類。3.第3類是依據(jù)實(shí)驗(yàn)室里面的廢物處理辦法差不
轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)技巧了解一下！2021/10/11
轉(zhuǎn)染可謂是做生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的大家經(jīng)常會(huì)考慮的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，大致原理也都是明白的。到底轉(zhuǎn)染是什么呢，為什么轉(zhuǎn)染效率不高呢，今天我們就來一起討論一下其中奧妙吧。轉(zhuǎn)染，就是在真核細(xì)胞里導(dǎo)入具有生物功能的核酸，并在細(xì)胞中維持其生物功能。轉(zhuǎn)染方法的選擇我們熟知且常用的轉(zhuǎn)染方法主要有物理介導(dǎo)，化學(xué)介導(dǎo)，生物介導(dǎo)。但實(shí)驗(yàn)室使用較多的主要有化學(xué)介導(dǎo)中的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染）和生物介導(dǎo)中的慢病毒轉(zhuǎn)染法。其中質(zhì)粒轉(zhuǎn)染操作簡(jiǎn)單，一般瞬時(shí)轉(zhuǎn)染選擇較多，但有些細(xì)胞系不容易轉(zhuǎn)染，因此選擇轉(zhuǎn)染方式時(shí)一定要做足功課，親身經(jīng)歷告訴我
微生物菌種衰退怎么辦？遠(yuǎn)慕教您來預(yù)防！2021/10/11
微生物長(zhǎng)期受到外界的影響，遺傳性狀必然發(fā)生某些變異。正是由于變異的存在才使得生物向前進(jìn)化。然而由于突變的存在，菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，可能會(huì)出現(xiàn)某些優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記丟失、典型特征改變等現(xiàn)象，稱為菌種衰退。比如蘇云金芽孢桿菌由于菌種衰退，導(dǎo)致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較小；保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失，導(dǎo)致H多價(jià)血清不凝固等。菌種衰退原因菌種衰退的根本原因是有關(guān)基因的負(fù)突變。如果控制產(chǎn)量的基因發(fā)生負(fù)突變，則表現(xiàn)為產(chǎn)量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負(fù)突變，則產(chǎn)生孢子的能力下降。菌種在
食用菌的制種菌種的鑒定與保存2021/10/11
（一）菌種的鑒定菌種的質(zhì)量，對(duì)食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量影響極大。因此，在培育菌種時(shí)，要認(rèn)真對(duì)待，嚴(yán)格把關(guān)，選用優(yōu)良菌株，逐級(jí)擴(kuò)大。在投入生產(chǎn)之前，必須進(jìn)行菌種質(zhì)量的鑒定，并通過小面積的栽培試驗(yàn)，證實(shí)是優(yōu)良菌種后，再推廣使用。常用鑒別菌種質(zhì)量的方法，有以下幾種：1.感官鑒別法主要是通過肉眼觀察菌絲的生長(zhǎng)情況和用鼻聞菌種的氣味等方式來鑒別菌種。一般優(yōu)良的菌種應(yīng)具有種性純，菌絲健壯，分枝濃密，生長(zhǎng)整齊，無雜菌或老化現(xiàn)象，同時(shí)各具有該食用菌的香氣。但由于食用菌的種類和特性不同，對(duì)菌種質(zhì)量的要求也不一樣。蘑菇的
做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，別忽視質(zhì)粒中內(nèi)毒素！2021/10/09
什么是內(nèi)毒素？細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的復(fù)合物，當(dāng)細(xì)菌裂解時(shí)便會(huì)大量釋放出來。內(nèi)毒素單位為EU。內(nèi)毒素對(duì)試驗(yàn)的影響內(nèi)毒素存在極大程度地影響轉(zhuǎn)染效率。同時(shí)內(nèi)毒素還可能激活免疫細(xì)胞的非特異反應(yīng)，造成實(shí)驗(yàn)中的假陽性。因此，為了保證高轉(zhuǎn)染率和轉(zhuǎn)染細(xì)胞高存活率，必須從質(zhì)粒制備的過程中將內(nèi)毒素去除。內(nèi)毒素和質(zhì)粒的關(guān)系由于內(nèi)毒素兩親性和負(fù)電荷性，性質(zhì)類似于DNA，因此在質(zhì)粒純化中會(huì)伴隨質(zhì)粒一同被純化出來。質(zhì)粒中內(nèi)毒素含量的高低常用EU/
提取的核酸濃度太低，滿足不了下游實(shí)驗(yàn)要求咋辦？2021/10/09
我們?cè)谶M(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，通常會(huì)對(duì)生物大分子的濃度有一定的要求，比如您要進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，加入細(xì)胞的質(zhì)粒濃度要求在1µg/µl，這樣才能得到比較高的轉(zhuǎn)染效率?？墒悄樘岬馁|(zhì)粒濃度只有200ng/µl，這時(shí)候該怎么辦呢？如何將質(zhì)粒濃度濃縮到理想的濃度呢？常用的方法有兩種：乙醇沉淀法和離心濃縮法。乙醇沉淀法：操作步驟：1.估算含有質(zhì)粒溶液的體積V，加入V/9體積的3MNaAc,使得NaAc終濃度為0.3M2.加入2倍體積的冷無水乙醇，冰上或者-20℃孵育20min3.最大離心速度（＞13000rp
水平電泳中的那些小問題，值得一看！2021/10/09
基因人最近收到不少老師和同學(xué)們對(duì)水平電泳的小疑惑——TAE和TBE兩個(gè)緩沖液有什么區(qū)別啊？100bp的DNA用多少濃度的膠檢測(cè)??？水平電泳一般用多大電壓跑?。俊菚r(shí)候給大家講講水平電泳的那些小問題了！不過估計(jì)大多數(shù)人都知道，不用再看了。1電泳方式用于分離核酸的凝膠電泳可分為垂直型和水平型。垂直型電泳，一般用聚丙烯酰胺作為支撐物。水平型電泳，凝膠板*浸泡在電極緩沖液下1-2mm，也稱為潛水式，一般使用瓊脂糖作為支撐物。可根據(jù)待檢測(cè)核酸分子的大小，選擇電泳方式。目前使用更多的還是水平型電泳。因制膠
黑色素細(xì)胞那些事，你了解嗎？2021/10/09
生活中我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，不同物種和個(gè)體的膚色會(huì)表現(xiàn)出區(qū)域特異性。不同長(zhǎng)度、厚度，不同身體部位的毛發(fā)色素沉積使我們有了不同的外觀，如：東方人大多是黃皮膚黑頭發(fā)，西方人很多是白皮膚金頭發(fā)。基于黑色素的色素沉積不僅賦予人體皮膚抵御紫外線（UV）輻射的能力，而且還促進(jìn)有害物質(zhì)（如重金屬）從體內(nèi)排出。黑色素細(xì)胞起源于神經(jīng)嵴，通過真皮遷移到表皮，最后遷移到毛囊。當(dāng)黑色素母細(xì)胞歸巢到毛囊凸起區(qū)域時(shí)，分化為黑色素細(xì)胞干細(xì)胞，黑色素細(xì)胞干細(xì)胞向下遷移并分化為毛發(fā)基質(zhì)中的成熟黑色素細(xì)胞。成熟的黑色素細(xì)胞進(jìn)一步分化生成黑色
原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟2021/10/08
原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長(zhǎng)法使細(xì)胞從人體和動(dòng)物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)。原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：1)整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行，所有的器材要高壓消毒。2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊巴bi妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同
哪些細(xì)胞會(huì)釋放細(xì)胞因子？2021/10/08
細(xì)胞因子是由免疫原、有絲分裂原或其他刺激物在各種細(xì)胞中誘導(dǎo)的低分子量可溶性蛋白質(zhì)。它們具有調(diào)節(jié)先天免疫和適應(yīng)性免疫、造血、細(xì)胞生長(zhǎng)、修復(fù)受損組織等多種功能。一般來講，細(xì)胞因子由各種細(xì)胞產(chǎn)生，包括巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞等免疫細(xì)胞。除此以外，內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和各種基質(zhì)細(xì)胞都能產(chǎn)生細(xì)胞因子。一種特定的細(xì)胞因子可能由多種類型的細(xì)胞產(chǎn)生。在本文中，我們重點(diǎn)介紹產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞。細(xì)胞因子的分類根據(jù)不同來源細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子類型不同，可將細(xì)胞因子分為以下三種類型。淋巴因子主要由淋巴細(xì)
廢棄的化學(xué)廢液及試劑瓶處理方法2021/10/08
隨著高科技生物和醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，試劑瓶在需求量不斷上升，由此產(chǎn)生了大量的廢棄試劑瓶。試劑多具有易燃、易爆等特性，那么用完的試劑瓶及廢液該怎樣處理呢？化學(xué)廢液處理：1、化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的廢棄化學(xué)實(shí)際和實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的有毒有害廢液、廢物，不能隨意倒入下水道，可以經(jīng)過中和符合廢液排放要求后排放。2、對(duì)其它無機(jī)廢液應(yīng)作預(yù)處理，使有害物質(zhì)沉淀，廢液符合排放要求后排放。3、對(duì)含銀、含鉻或其它含貴金屬、重金屬的廢液，應(yīng)分別儲(chǔ)存，盡量回收利用，不得隨意排放。4、遇潮、遇水容易起化學(xué)反應(yīng)及性質(zhì)不穩(wěn)定、易分解變質(zhì)的化學(xué)藥品和一
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