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細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(陽離子聚合物法,非脂質(zhì)體)

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        貝博生物專注于生命科學(xué)研究用試劑產(chǎn)品的研究、開發(fā)、市場推廣和技術(shù)服務(wù)。致力于為中國廣大客戶提供量身定制的科研用試劑產(chǎn)品和專業(yè)技術(shù)服務(wù),幫助科研人員加速生物領(lǐng)域的研究進(jìn)展。 貝博生物將以高品質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)打造中國*實力的試劑品牌。

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蛋白提取,細(xì)胞分析

保存溫度
-20℃保存
注意事項
注意微生物污染
有效期
一年
使用注意事項
1. 注意無菌操作,盡量避免污染。
2. DNA不應(yīng)含有蛋白和酚。
3. 為了取得較高的轉(zhuǎn)染效率,推薦使用在50代以內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)。
4. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件,要確保OD260/OD280≥1.8.
5. 該轉(zhuǎn)染試劑不應(yīng)渦旋或離心,宜緩慢晃動混勻。
6. 在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗中,可通過預(yù)實驗在轉(zhuǎn)染試劑:DNA(ug)=2:1~6:1之間選擇比例。
7. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,如細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)及密度、DNA/siRNA轉(zhuǎn)染量、轉(zhuǎn)染試劑與DNA/siRNA比例等,應(yīng)再具體實驗中優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件。
使用方法

DNA轉(zhuǎn)染(以12孔板為例):
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞,取適量對數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中,并將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),待細(xì)胞密度大70~90%滿時即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計算,如果轉(zhuǎn)染器皿不同,請按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的DNA之前2~4h,加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液,置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液,但抗生素使某些細(xì)胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細(xì)胞毒性。
3. 配制染色工作液:取2個無菌離心管,分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液,取其中一離心管加入1.6~3ugDNA,輕輕混勻;取另一離心管加入3ul轉(zhuǎn)染試劑,輕輕混勻。室溫靜置5min,將含有DNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中,輕輕吹打混勻,室溫靜置20min。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中,輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)。
5. 培養(yǎng)4~6h后,更換為含有血清的培養(yǎng)液。對于Hela細(xì)胞,推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液;對于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 細(xì)胞,推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
6. 繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后,觀察或收集細(xì)胞或加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物如G418等進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選。

(二)siRNA轉(zhuǎn)染(以12孔板為例):
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細(xì)胞,取適量對數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中,并將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),待細(xì)胞密度大50~80%滿時即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計算,如果轉(zhuǎn)染器皿不同,請按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的siRNA之前2~4h,加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液,置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液,但抗生素使某些細(xì)胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細(xì)胞毒性。
3. 配制染色工作液:取2個無菌離心管,分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液,取其中一離心管加入40pmol siRNA,輕輕混勻;取另一離心管加入2ul轉(zhuǎn)染試劑,輕輕混勻。室溫靜置5min,將含有siRNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中,輕輕吹打混勻,室溫靜置20min。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中,輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)。
5. 培養(yǎng)4~6h后,更換為含有血清的培養(yǎng)液。對于Hela細(xì)胞,推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液;對于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 細(xì)胞,推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
6. 繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后,觀察或收集細(xì)胞。


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