轉(zhuǎn)染試劑
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/30 13:18:53
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保存溫度
-20℃保存
注意事項
注意微生物污染
有效期
一年
儀器準備
1. 離心機
2. 移液器3. 冰箱
2. 移液器3. 冰箱
試劑準備
1. PBS
2. 消化液
3. 培養(yǎng)液和不培養(yǎng)液
2. 消化液
3. 培養(yǎng)液和不培養(yǎng)液
使用注意事項
1. 注意無菌操作，盡量避免污染。
2. 使用高純度DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。DNA不應含有蛋白和酚。
3. 為了取得較高的轉(zhuǎn)染效率，推薦使用在50代以內(nèi)的細胞進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)。
4. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保OD260/OD280≥1.8.
5. 該轉(zhuǎn)染試劑不應渦旋或離心，宜緩慢晃動混勻。
6. 在體外細胞轉(zhuǎn)染實驗中，可通過預實驗在轉(zhuǎn)染試劑：DNA（ug）=2:1~6:1之間選擇比例。
7. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，如細胞類型、細胞狀態(tài)及密度、DNA/siRNA轉(zhuǎn)染量、轉(zhuǎn)染試劑與DNA/siRNA比例等，應再具體實驗中優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件。
2. 使用高純度DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。DNA不應含有蛋白和酚。
3. 為了取得較高的轉(zhuǎn)染效率，推薦使用在50代以內(nèi)的細胞進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)。
4. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保OD260/OD280≥1.8.
5. 該轉(zhuǎn)染試劑不應渦旋或離心，宜緩慢晃動混勻。
6. 在體外細胞轉(zhuǎn)染實驗中，可通過預實驗在轉(zhuǎn)染試劑：DNA（ug）=2:1~6:1之間選擇比例。
7. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，如細胞類型、細胞狀態(tài)及密度、DNA/siRNA轉(zhuǎn)染量、轉(zhuǎn)染試劑與DNA/siRNA比例等，應再具體實驗中優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件。
使用方法
DNA轉(zhuǎn)染（以12孔板為例）：
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細胞，取適量對數(shù)期細胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中，并將細胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待細胞密度大70～90%滿時即可進行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計算，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的DNA之前2～4h，加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液，但抗生素使某些細胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細胞毒性。
3. 配制染色工作液：取2個無菌離心管，分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液，取其中一離心管加入1.6~3ugDNA，輕輕混勻；取另一離心管加入4ul脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。室溫靜置5min，將含有DNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中，輕輕吹打混勻，室溫靜置20min。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對應細胞培養(yǎng)液中，輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)。
5. 培養(yǎng)4~6h后，更換為含有血清的培養(yǎng)液。對于Hela細胞，推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液；對于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 細胞，推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后，觀察或收集細胞或加入適當?shù)暮Y選藥物如G418等進行穩(wěn)定細胞株的篩選。
（二）siRNA轉(zhuǎn)染（以12孔板為例）：
1. 在轉(zhuǎn)染前18~24h用消化培養(yǎng)細胞，取適量對數(shù)期細胞轉(zhuǎn)移至新的12孔板中，并將細胞培養(yǎng)板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待細胞密度大50～80%滿時即可進行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按12孔板計算，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2. 在加入待轉(zhuǎn)染的siRNA之前2～4h，加入1ml不含抗生素的培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鮮培養(yǎng)液，但抗生素使某些細胞轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定的細胞毒性。
3. 配制染色工作液：取2個無菌離心管，分別加入50ul不含抗生素和血清的培養(yǎng)液，取其中一離心管加入40pmol siRNA，輕輕混勻；取另一離心管加入2ul轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。室溫靜置5min，將含有siRNA的培養(yǎng)液用微量移液器輕輕加入含有轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中，輕輕吹打混勻，室溫靜置20min。
4. 將上述轉(zhuǎn)染工作液逐滴滴入對應細胞培養(yǎng)液中，輕輕混勻后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)。
5. 培養(yǎng)4~6h后，更換為含有血清的培養(yǎng)液。對于Hela細胞，推薦在轉(zhuǎn)染4h更換培養(yǎng)液；對于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 細胞，推薦在轉(zhuǎn)染6h更換培養(yǎng)液。
6. 繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后，觀察或收集細胞。
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