胞質(zhì)注射實驗
- 公司名稱 上海達為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/10 14:05:36
- 訪問次數(shù) 112
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制作動物模型 細胞培養(yǎng) 分子生物學檢測 病理學形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學檢測 提供培訓服務各種檢驗儀器設備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
一、技術(shù)定義與核心原理
胞質(zhì)注射是顯微注射技術(shù)的一種,通過顯微操作系統(tǒng)將外源基因直接注入細胞質(zhì)(而非細胞核),實現(xiàn)基因?qū)搿F浜诵臋C制包括:
非整合性表達:外源DNA以游離體形式存在,通過細胞自身轉(zhuǎn)錄機制表達,不整合至宿主基因組(區(qū)別于原核注射的隨機整合)。
適用性廣:可操作單細胞(如原代細胞、干細胞)及多細胞胚胎(如2細胞期胚胎)。
瞬時表達為主:外源基因隨細胞分裂逐漸丟失,表達周期較短(通常<72小時)。
生物學基礎:
依賴細胞質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶完成外源基因表達,無需核定位信號(NLS)介導。
二、標準化操作流程
(一)設備與材料準備
組件 | 參數(shù)要求 | 功能說明 | 引用來源 |
---|---|---|---|
顯微操作系統(tǒng) | 微操縱器精度0.1μm,注射針內(nèi)徑<0.5μm | 精準控制注射位置與深度 | |
外源DNA溶液 | 濃度1-5 ng/μL,溶于低離子強度緩沖液(如TE) | 減少細胞毒性,提升表達效率 | |
靶細胞類型 | 原代角質(zhì)形成細胞、HEK-293T、早期胚胎等 | 需具備較強DNA攝取與表達能力 |
(二)操作步驟

關(guān)鍵參數(shù):
注射壓力:5-10 hPa(過高導致細胞破裂)。
注射時長:單細胞≤30秒,避免細胞脫水。
存活率控制:熟練操作下細胞存活率>80%,胚胎存活率>70%。
(三)表達驗證方法
熒光標記法:
注射含GFP/RFP報告基因的載體,24小時后熒光顯微鏡觀察。
蛋白檢測法:
Western Blot或免疫組化檢測目標蛋白表達。