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當(dāng)前位置:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司>>技術(shù)文章>>鱟試驗法中的干擾因素有哪些?
由鱟試驗的反應(yīng)機理我們可以知道:內(nèi)毒素在二價陽離子參與下,作用凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生一系列生化反應(yīng),最后形成凝膠。因此,一切阻礙反應(yīng)機制的因素,均干擾凝膠的形成,形成假陰性結(jié)果,作為干擾凝集反應(yīng)的物質(zhì)主要有:人血中的多種凝血因子、很多中藥成分、某些生化藥品、抗生素、可使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)、高糖溶液、絡(luò)合物等等,此外樣品的pH值,反應(yīng)溫度等也都有一定的影響(表2)。
另外一些金屬離子(如 Fe、Al、Ca)會對細(xì)菌內(nèi)毒素活性產(chǎn)生影響,從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此在實驗時,避免使用一些金屬用具,而使用玻璃用具。
關(guān)于供試品中自身成分的影響,可以說是鱟試驗中影響因素最大的,作為供試品,既有對LAL或TAL試劑的活性產(chǎn)生影響的因素,也有對細(xì)菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響因素,因此在實際測定時要引起注意。
(1)供試品對鱟試劑的活性產(chǎn)生影響的因素為:蛋白酶、蛋白酶抑制作用,螯合劑、蛋白變性劑等。
(2)供試品對細(xì)菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響的因素:金屬離子(鐵、鋁、鍺等),表面活性劑等。
(3)對主反應(yīng)以外的測定系統(tǒng)產(chǎn)生影響的場合:濁度、顏色、磺胺制劑(合成基質(zhì)化的偶氮化反應(yīng)時)等。
在這些共存物質(zhì)的影響當(dāng)中,特別要引起注意的是些外界金屬離子的影響,尤其是在舊菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的溶解及稀釋過程中一定特別注意金屬離子的混入,最-好的方法是使用玻璃制備的蓋子。
對于大多數(shù)的注射劑一般在原液時均存在干擾作用,然而當(dāng)把樣品用水進行稀釋后即可排除干擾,而對于稀釋法不能排除干擾的樣品,可考慮用其他方法給予解決。如:中和法、過濾法以及透析方法等,目前市場上見到鱟試劑主要為TAL試劑和LAL試劑。因為工藝不同,抗干擾能力的強弱不一,因此對同一樣品、使用不同廠家的LAL試劑所出現(xiàn)的最大無干擾濃度是不同的,這一點要引起注意。另外,TAL試劑和LAL試劑是否完-全等活性關(guān)系還有待進一步研究和探討。
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