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島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司 SGLC
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首頁(yè) >> 技術(shù)文章 >> 特色應(yīng)用|非衍生法結(jié)合 LC-MSMS 分析 21 種氨基酸
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非衍生法結(jié)合
LC-MSMS 分析
21 種氨基酸
摘要
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本文建立了21 種氨基酸非衍生法的 LC-MS/MS 測(cè)定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生，直接采用 Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離，島津串聯(lián)質(zhì)譜 LCMS-8050 檢測(cè)分析，21 種氨基酸保留強(qiáng)，峰型對(duì)稱，且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測(cè)定提供參考。
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實(shí)驗(yàn)部分
1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
Shimadzu LC-30AD與LCMS-8050 聯(lián)用系統(tǒng)；
色譜柱:Shim-pack GIST Amide（3 μm，2.1×100 mm；P/N:227-30818-04）；
SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器（P/N:380-00341）；
LC-MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
Nichipet Air 移液槍：
Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N:00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（P/N:00-NAR-100） ；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N:00-NAR-1000） ；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N:00-NAR-10000） 。
1.2 混合對(duì)照品溶液的制備
分別稱取 21 種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，加水溶解并稀釋至 1 mg/mL，制成各標(biāo)準(zhǔn)品母液；分別移取各標(biāo)準(zhǔn)品母液適量，加 50%乙腈水稀釋至 50 ng/mL，混勻，備用。
1.3 分析條件
UHPLC 條件：
色譜柱：Shim-pack GIST Amide（3μm，2.1×100 mm；P/N：227-30818-04）
流速：0.5 mL/min；
進(jìn)樣量：1 μL
柱溫：40 ℃
流動(dòng)相：A：0.05 %甲酸水溶液
B：乙腈
梯度洗脫程序如下：
質(zhì)譜條件：
離子化模式：ESI，正離子掃描；
掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）
碰撞氣：氬氣
加熱氣：干燥空氣 10 L/min
霧化氣：氮?dú)?3 L/min
干燥氣：氮?dú)?10 L/min
接口溫度：300℃ DL
溫度：150 ℃
加熱模塊溫度：400 ℃
MRM 參數(shù)見下表
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
21 種氨基酸+γ-氨基丁酸混標(biāo)溶液 MRM 譜圖（濃度：50 ng/mL）
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結(jié)論
本文建立了21 種氨基酸非衍生法的LC-MS/MS 測(cè)定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生，直接采用Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離，島津串聯(lián)質(zhì)譜LCMS-8050 檢測(cè)分析，21 種氨基酸保留強(qiáng)，峰型對(duì)稱，且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測(cè)定提供參考。
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