Annexin V-FITC / PI 雙染細胞凋亡檢測 Annexin V-FITC / PI 雙染細胞凋亡檢測
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Annexin V-FITC / PI 雙染細胞凋亡檢測是一種常用的流式細胞術方法，用于分析細胞凋亡的不同階段。該方法利用兩種熒光標記物（Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI））來標記細胞不同的凋亡階段，從而實現(xiàn)對細胞凋亡的定量分析。其原理如下：
原理
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Annexin V-FITC標記：
- Annexin V是一種能與磷脂酰絲氨酸（PS）結合的蛋白質(zhì)。正常健康的細胞，其細胞膜內(nèi)側(cè)是帶有磷脂酰絲氨酸（PS）的，而細胞死亡或凋亡時，PS會從細胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)。
- Annexin V結合到外翻的PS上，因此可以標記出早期凋亡的細胞。Annexin V通常與FITC（熒光素異硫氰酸酯）結合，使其能夠在流式細胞儀中通過綠色熒光檢測。
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PI標記：
- PI是一種能夠穿透破損細胞膜的染料。在細胞死亡后，PI能夠進入細胞，染色DNA，發(fā)出紅色熒光。
- PI染色的作用是標記晚期凋亡或壞死細胞，因為晚期凋亡細胞的細胞膜完整性已被破壞，PI可以進入這些細胞。
檢測的四個細胞群體：
通過Annexin V-FITC和PI雙染染色，可以將細胞分為四個群體，分別代表不同的凋亡狀態(tài)：
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Annexin V-FITC+/PI-（早期凋亡細胞）：
- 這些細胞表面PS外翻，但細胞膜尚未破裂，因此沒有PI進入。
-
Annexin V-FITC+/PI+（晚期凋亡或壞死細胞）：
- 這些細胞既有PS外翻，且細胞膜已經(jīng)受損，導致PI可以進入并染色DNA。
-
Annexin V-FITC-/PI-（活細胞）：
- 這些細胞沒有PS外翻，細胞膜完整，因此未被Annexin V和PI染色。
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Annexin V-FITC-/PI+（壞死細胞）：
- 這些細胞細胞膜破損，PI進入并染色DNA，但沒有PS外翻，因此Annexin V不與其結合。
流式細胞術分析
- 通過流式細胞儀，結合Annexin V-FITC和PI的熒光信號，可以對細胞進行分類并定量分析不同類型的細胞（如活細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞）。流式細胞儀的檢測可以快速提供每個群體的比例，幫助研究人員評估細胞的凋亡過程。
應用
Annexin V-FITC / PI雙染細胞凋亡檢測廣泛應用于：
- 研究細胞凋亡機制
- 藥物篩選和治療效果評估
- 細胞應激反應研究
- 免疫學和癌癥研究
通過這種雙染方法，研究人員能夠準確區(qū)分細胞在凋亡過程中的不同階段，并對細胞死亡的類型和機制進行深入分析。
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