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HPLC固定相：疏水性相互作用固定相
閱讀：1559 發(fā)布時間：2016-1-20
疏水性相互作用色譜（HIC）是為了適應(yīng)活性生物大分子，特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來的一種液相色譜方法。
分離機理與反相色譜的強疏水性作為類型，但是其分離機制更多地依賴于溶質(zhì)與填料表面之間弱的疏水性相互作用。HIC柱填料的表面具有弱疏水性特征，在高離子強度流動相條件下，蛋白質(zhì)分子中的疏水性部分與填料表面產(chǎn)生疏水性相互作用而被吸附，當流動相的離子強度逐漸降低時，蛋白樣品則按其疏水性特征被依次洗脫，疏水性越強，洗脫的時間越長，進而實現(xiàn)分離。與反相色譜比較，HIC方法避免了流動相中使用大量有機溶劑，能有效的保持被分離物質(zhì)的生物活性，因此在生化樣品的分離純化方面被廣泛采用。
常見的商品鍵合相HIC填料基質(zhì)材料包括硅膠和高聚物兩種。高聚物基質(zhì)包括多糖型凝膠和合成高聚物微球等。
為了提高基質(zhì)表面的疏水性，可以采用鍵合羥丙基、甲基、丙基、丁基、苯基、戊基、苯甲基等段煉烷烴的方法，也可以在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易斯酸催化下接上短鏈烷氧基制成醚型鍵合相；將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反相，則可制備出聚乙二醇型HIC填料。