大小鼠中綠膿桿菌的感染和檢測方法

綠膿桿菌廣泛存在于自然界中，是革蘭氏陰性桿菌，常寄生于人和動(dòng)物的體表、呼吸道、消化道，免疫力下降是重要的發(fā)病誘因，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)可引起全身性感染，在燒傷感染中綠膿桿菌檢出率較高，也有綠膿桿菌引起新生兒腹瀉爆發(fā)流行的案例。

對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而言，SPF 小鼠及無菌小鼠被綠膿桿菌感染后，多數(shù)不表現(xiàn)癥狀，以潛伏感染為主，當(dāng)宿主免疫系統(tǒng)受損，常可引起感染、炎癥、敗血癥甚至死亡等。但進(jìn)行醫(yī)藥、生物制品實(shí)驗(yàn)時(shí)，常影響試驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，故綠膿桿菌已被列為無特定病原體小鼠必須排除的細(xì)菌之一。綠膿桿菌感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，給育種繁殖工作帶來困難，綠膿桿菌對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的危害應(yīng)引起足夠的重視。

綠膿桿菌是SPF級(jí)小鼠必檢項(xiàng)目, 主要定植于腸道內(nèi)和糞便中。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的細(xì)菌可以在特定的部位定植, 可在不同的培養(yǎng)基中生長, 有不同的菌落形態(tài)。與生化試劑有特殊的生化反應(yīng)。80年代為迅速測出SPF 小鼠體內(nèi)是否被綠膿桿菌感染，曾經(jīng)用噬菌體裂解試驗(yàn)。

綠膿桿菌的檢測目前多采用病原學(xué)的檢測方法, 即通過分離培養(yǎng)、菌落形態(tài)特征和生化反應(yīng)特征來確定動(dòng)物體中是否感染病原菌。這是目前較為可靠、直接的檢測方法。該方法在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測中應(yīng)用廣泛, 也是主要的檢測方法。但是, 該方法具有操作不便、工作量大等缺點(diǎn)。

新國標(biāo)GB14922-2022中指出，綠膿桿菌的檢測用GB14926的檢測方法進(jìn)行檢測。國標(biāo)GB14926中指出：“綠膿桿菌是革蘭陰性桿菌，具有產(chǎn)生綠色色素和氧化酶等生化試驗(yàn)特征。因此，可利用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)、菌體檢驗(yàn)和生化試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。"根據(jù)國標(biāo)的內(nèi)容，綠膿桿菌大部分菌落可產(chǎn)生綠色色素而致使培養(yǎng)基呈綠色。當(dāng)被檢菌為革蘭陰性桿菌，氧化酶陽性及產(chǎn)生綠色色素，可報(bào)告檢出綠桿菌。有時(shí)也需要結(jié)合一些生化反應(yīng)來確認(rèn)綠膿桿菌的感染。

當(dāng)前分子生物學(xué)的PCR檢測方法也是綠膿桿菌的重要檢測方式，這種檢測方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測的靈敏度高，方便快捷，避免了菌株培養(yǎng)的繁瑣流程和時(shí)間。一般6小時(shí)之內(nèi)可以出檢測結(jié)果。正是由于這種便捷性和靈敏度，越來越多實(shí)驗(yàn)者使用PCR方式進(jìn)行綠膿桿菌的檢測和陽性復(fù)檢確認(rèn)。