植物3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒樣品收集方法:

【組織勻漿】:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。 將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

【細(xì)胞培養(yǎng)上清】:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。
注意事項：樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融。  如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品值,請根據(jù)實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。

植物3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒使用指南：

步驟一：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，室溫放置30分鐘以確保所有試劑穩(wěn)定。

步驟二：根據(jù)待測樣本數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條密封放回冰箱。

步驟三：分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔、待測樣品孔（為避免實驗誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔）。

步驟四：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白孔中，空白對照孔加入50ul的蒸餾水。齊譽孔加入50ul的待測樣本。

步驟五：標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔各孔加入100ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。

步驟六：酶標(biāo)板用封板膜密封后放入濕盒于37℃恒溫孵育1小時。

步驟七：洗板。用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15~30秒，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙拍干

步驟八：各孔分別加入底物A、底物B 50ul（不用吹打）

步驟九：37℃避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液

步驟十：在450nm波長讀取各孔的OD值