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單克隆抗體(monoclonal antibody, mAb)質(zhì)譜測序可用于詳細分析單克隆抗體的結(jié)構(gòu),包括其氨基酸序列、糖基化位點、氧化或還原修飾等。這種分析對于抗體的研發(fā)、質(zhì)量控制以及機制研究至關(guān)重要。這種技術(shù)的主要應(yīng)用是在生物醫(yī)藥領(lǐng)域,用于抗體藥物的開發(fā)、抗體的鑒定、以及研究免疫反應(yīng)。
圖1.抗體測序示意圖
單抗抗體測序的過程通常分為以下幾步:
樣本準(zhǔn)備是質(zhì)譜分析的首要步驟,包括蛋白質(zhì)純化、濃縮、去鹽、酶解(通常使用yídànbáiméi或其他特異性蛋白酶)等過程。這一步驟的目的是將復(fù)雜的生物樣品轉(zhuǎn)化為適合質(zhì)譜分析的形式。
單克隆抗體的質(zhì)譜分析可以通過多種技術(shù)進行,包括但不限于:
MALDI-TOF MS(基質(zhì)輔助激光解吸/飛行時間質(zhì)譜):適用于測量大分子如蛋白質(zhì)和多肽的質(zhì)量。
ESI-MS(電噴霧電離質(zhì)譜):可以直接分析溶液中的蛋白質(zhì),適用于蛋白質(zhì)復(fù)合物的分析,可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)大小、結(jié)構(gòu)和亞單位組成的信息。
LC-MS/MS(液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜):結(jié)合液相色譜分離和串聯(lián)質(zhì)譜分析,適用于蛋白質(zhì)混合物,特別是進行肽段級別的分析,提供氨基酸序列信息。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析需要zhuānyè的軟件和算法,以識別蛋白質(zhì)/肽段的質(zhì)量、推斷氨基酸序列、確定糖基化位點和其他翻譯后修飾。數(shù)據(jù)分析可以揭示抗體的詳細分子結(jié)構(gòu)信息,包括變異區(qū)(CDRs)的jīngquè序列,這對于理解其與抗原的結(jié)合特異性至關(guān)重要。
通過質(zhì)譜技術(shù),可以詳細分析單克隆抗體的關(guān)鍵特性,如:
翻譯后修飾:糖基化、磷酸化、氧化等。
變異和異質(zhì)性:例如,由于不同的翻譯后修飾而產(chǎn)生的異質(zhì)性。
序列一致性:確認生產(chǎn)過程中抗體的序列一致性和正確性。
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