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二硫鍵(或稱為硫橋)是一種半guāngānsuān殘基上的硫原子之間的共價鍵,它在許多dànbáizhì中起到穩(wěn)定dànbáizhì三維結(jié)構(gòu)的作用。對于許多dànbáizhì,二硫鍵的形成是其獲得正確折疊和功能的關(guān)鍵。
圖1
檢測和鑒定二硫鍵有多種方法,以下列舉了一些常用的技術(shù):
1、質(zhì)譜法(Mass Spectrometry):
在質(zhì)譜中,dànbáizhì首先被斷裂成較小的片段。通過檢測這些片段并對其進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,可以確定硫橋連接的半guāngānsuān殘基的位置。
2、Ellman's試劑(也稱為DTNB):
該試劑可以與游離的半guāngānsuān及還原的二硫鍵反應(yīng),產(chǎn)生黃色的產(chǎn)物,其吸光度可以在412 nm處進(jìn)行測量。通過比較樣品在不同條件下的吸光度,可以估計二硫鍵的數(shù)量。
3、X射線晶體學(xué):
對于可以得到其結(jié)晶的dànbáizhì,X射線晶體學(xué)可以直接觀察dànbáizhì的原子結(jié)構(gòu),從而確定二硫鍵的位置。
4、核磁共振(NMR):
和X射線晶體學(xué)類似,NMR可以提供dànbáizhì的原子級分辨率結(jié)構(gòu),從而鑒定二硫鍵。
5、熒光標(biāo)記法:
某些熒光試劑可以與游離的半guāngānsuān殘基反應(yīng),但不與形成二硫鍵的半guāngānsuān反應(yīng)。這種方法可以用來估計游離半guāngānsuān的數(shù)量。
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