蛋白磷酸化測定

蛋白磷酸化測定檢測技術服務詳情介紹

蛋白磷酸化是細胞內重要的信號轉導機制，涉及許多細胞功能，如生長、分裂、死亡和應答等。磷酸化的蛋白在細胞信號轉導中起著關鍵作用。因此，研究蛋白磷酸化對于理解細胞生物學和疾病進展是非常重要的。

圖1. 酸化定量蛋白組學分析流程

蛋白磷酸化的測定通常使用以下幾種方法：

1、放射性標記法：

通常使用γ-32P ATP作為放射性磷酸供體，經由蛋白激酶催化，使目標蛋白進行磷酸化。然后，通過放射性測定來檢測蛋白磷酸化的水平。

2、Western blotting：

利用對特定磷酸化位點有特異性的抗體進行檢測。首先，蛋白樣品經過SDS-PAGE電泳分離，然后轉移到PVDF或nitrocellulose膜上，之后用特異的磷酸化抗體進行檢測。

圖2. Far-Western Blot分析

3、質譜法：

通過蛋白或多肽的質譜分析，可以jīngquè地確定蛋白磷酸化的位點和程度。常用的技術包括液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）。

4、Phos-tag凝膠電泳：

Phos-tag是一種能與磷酸化部位結合的化合物。在Phos-tag SDS-PAGE中，磷酸化的蛋白會在凝膠中移動變慢，從而與非磷酸化的蛋白分離。

5、ELISA（酶聯免疫吸附測定法）：

利用磷酸化特異性抗體，可以構建ELISA實驗來測定樣品中磷酸化蛋白的水平。

6、流式細胞儀：

利用磷特異性抗體和熒光標記，可以通過流式細胞儀來分析單細胞水平上的蛋白磷酸化情況。

選擇蛋白磷酸化測定的方法時，需要考慮樣品的性質、所需的敏感度和分辨率、可用的儀器設備以及實驗的預期目標。

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