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寡糖鏈結(jié)構(gòu)分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

糖基化對(duì)于生物制品的療效、穩(wěn)定性和免疫原性具有重要的影響。其中，寡糖譜和糖鏈結(jié)構(gòu)是評(píng)估生物制品特性的重要指標(biāo)。寡糖作為一種重要的碳水化合物，參與多種細(xì)胞生命過(guò)程，如蛋白質(zhì)折疊和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此外，寡糖常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成糖蛋白。糖蛋白常位于細(xì)胞表面，參與細(xì)菌和病毒的識(shí)別，以及與凝集素等其他蛋白質(zhì)的相互作用，對(duì)于生物制品正常功能的實(shí)現(xiàn)至關(guān)重要。

寡糖的合成不是通過(guò)模板的方式進(jìn)行的，并且呈現(xiàn)出樹狀結(jié)構(gòu)，這增加了寡糖結(jié)構(gòu)解析的難度。為此，百泰派克生物科技BTP開發(fā)了一系列穩(wěn)定、高效的液相色譜高分辨質(zhì)譜（LC-MS/MS）表征方法。這些方法涵蓋了從糖鏈分析、糖基化位點(diǎn)鑒定，到糖肽解析的完整分析流程。通過(guò)這些方法，我們能夠有效地研究和解析寡糖的結(jié)構(gòu)和功能特性，從而更好地理解糖基化對(duì)生物制品的影響。糖基化分析基本流程圖如下所示：

圖1 糖基化分析流程圖

基本原理

寡糖鏈的分析通常借助液質(zhì)聯(lián)用的高分辨質(zhì)譜平臺(tái)。首先，使用PNGase F糖苷酶將糖鏈從糖蛋白上水解。隨后，采用2-AB試劑對(duì)水解后的糖鏈進(jìn)行衍生化標(biāo)記。標(biāo)記完成后，將糖鏈樣品注入液相色譜高分辨質(zhì)譜平臺(tái)，進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。通過(guò)糖鏈分析軟件，對(duì)采集到的質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。

在分析過(guò)程中，液相色譜設(shè)備配備了熒光檢測(cè)器，可用于糖鏈的定量。同時(shí)，串聯(lián)的高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)用于對(duì)糖鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析和鑒定。這些分析方法結(jié)合了質(zhì)譜和色譜技術(shù)，能夠有效地揭示寡糖鏈的結(jié)構(gòu)和特性。

圖2 實(shí)驗(yàn)流程

實(shí)驗(yàn)儀器

HILIC-UHPLC/AB SCIEX 5600+

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示

基于HILIC-UHPLC-MS/MS的N糖分析是目前主流的分析方法。親水相互作用色譜法（HILIC）被用于N糖的分離。通過(guò)PNGase F酶的反應(yīng)，N糖被釋放出來(lái)。隨后，利用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）對(duì)釋放的糖鏈進(jìn)行衍生化。這種衍生化使得大量樣本的N糖得以分析。衍生化后的N糖通過(guò)HILIC-UHPLC-MS進(jìn)行檢測(cè)。zuì后，通過(guò)使用專門的軟件進(jìn)行全自動(dòng)結(jié)構(gòu)解析，得到檢測(cè)結(jié)果。這種方法能夠高效地進(jìn)行N糖的分析，為研究N糖的結(jié)構(gòu)和特性提供了有效的手段。得到的N糖糖型及糖鏈結(jié)構(gòu)解析結(jié)果如下展示：

圖3 樣品的N糖糖型

圖4 樣品的N糖糖型對(duì)應(yīng)的糖鏈結(jié)構(gòu)

*以上為質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)軟件解析得到的糖型及糖鏈結(jié)構(gòu)。

常見問(wèn)題

問(wèn)題1：寡糖結(jié)構(gòu)的常用表示方式是什么？

回答：寡糖結(jié)構(gòu)的常用表示方式為：

問(wèn)題2：熒光檢測(cè)器和質(zhì)譜的作用分別是什么？

回答：熒光檢測(cè)器主要用于檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度，可用于定量分析。在糖基化分析中，熒光檢測(cè)器通常用于定量測(cè)定糖鏈的含量，因?yàn)樘擎溄?jīng)過(guò)衍生化標(biāo)記后，具有熒光特性，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與糖鏈的含量成正比。

質(zhì)譜主要用于測(cè)定分子的質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息。在糖基化分析中，質(zhì)譜可用于確定糖型，即分析糖鏈的組成和序列，以及確定修飾位點(diǎn)和修飾效率。通過(guò)質(zhì)譜技術(shù)，可以獲取糖鏈的質(zhì)量信息，如分子量、碳水化合物的組成以及修飾的位置等重要參數(shù)。

熒光檢測(cè)器和質(zhì)譜在糖基化分析中通常是同時(shí)采集的。熒光檢測(cè)器提供了定量測(cè)定糖鏈含量的信息，而質(zhì)譜提供了糖型的結(jié)構(gòu)信息。綜合利用這兩種技術(shù)，可以確定糖蛋白的糖型和比例，從而更全面地了解糖基化的特征和影響。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)蛋白質(zhì)的氨基酸組成分析，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質(zhì)N端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的蛋白質(zhì)，提供基于從頭測(cè)序法的蛋白質(zhì)從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100%的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質(zhì)組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白質(zhì)組學(xué)、靶向蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種蛋白質(zhì)標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質(zhì)、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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