體電鏡vEM技術(shù)近年因《Nature》的點(diǎn)名備受關(guān)注，因其正重新定義生命科學(xué)研究的尺度邊界。傳統(tǒng)電子顯微鏡雖具備納米級分辨率，但數(shù)據(jù)多為二維結(jié)構(gòu)。vEM通過連續(xù)片層掃描與三維重構(gòu)算法的結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對生物樣本從亞細(xì)胞級到組織級的跨尺度成像。
針對本課題，本次網(wǎng)絡(luò)研討會，賽默飛邀請來自廣州醫(yī)科大學(xué)的陳浩教授，分享其研究利用體電鏡技術(shù)（volume electron microscopy, vEM），在哺乳動物附睪上皮細(xì)胞和小腸上皮細(xì)胞間發(fā)現(xiàn)并命名了一種新型細(xì)胞器儲存結(jié)構(gòu)—細(xì)胞間細(xì)胞器儲存庫（Intercellular Organelle Reservoirs, IORs），揭示了其在細(xì)胞器周轉(zhuǎn)和回收過程中的重要作用。
會議內(nèi)容干貨十足，現(xiàn)場討論也非常熱烈，特此加推回顧篇，可以給到遺憾未能參加現(xiàn)在直播研討會的學(xué)者們回顧會議內(nèi)容的機(jī)會。
識別二維碼觀看視頻回顧
Q&A集錦
1個細(xì)胞10um,老師的數(shù)據(jù)組織塊是11um,13um左右，所以是想盡量還原單層細(xì)胞，然后進(jìn)行重構(gòu)？是不是理解成控制在單層細(xì)胞水平進(jìn)行重構(gòu)？
是的，主要是控制在單層細(xì)胞進(jìn)行重構(gòu)。10um便能看到一個相對完整的細(xì)胞。
好奇是如何具體定義IOR中各種結(jié)構(gòu)的，電鏡上主要通過形態(tài)嘛？
是的，在電鏡的成像上能非常清楚的看到各個細(xì)胞細(xì)胞器的形態(tài)。比如能很清楚的看到蛋白聚集體，溶酶體，像自噬小體也能能清楚辨認(rèn)的。
這個IOR區(qū)域，在精子成熟過程中，有沒有實(shí)質(zhì)性作用？
推測是有作用的。IOR分布在三維結(jié)構(gòu)側(cè)面，本身的結(jié)構(gòu)對精子應(yīng)該不是直接影響，推測會間接影響。我們目前在Rab27a小鼠上發(fā)現(xiàn)，如果沒有Rab27a，會發(fā)現(xiàn)側(cè)面IOR泡狀結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)減少，精子活力下降，生育力也降低。故此說明IOR泡狀結(jié)構(gòu)會影響上皮細(xì)胞功能，最后影響到管腔里面精子的功能。
IOR的外圍是膜結(jié)構(gòu)，在體電鏡觀察中，有沒有觀察到它與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-質(zhì)膜，存在接觸位點(diǎn)，或者膜通道？
IOR外圍的膜，是生物自己的細(xì)胞膜。我們在體電鏡的結(jié)果下觀測到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)確實(shí)和細(xì)胞膜，以及線粒體有一定交互。但是由于試驗(yàn)過程中沒有很好的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)marker去標(biāo)示，所以在本次結(jié)果中，我們沒有將它標(biāo)記出來。
請問是否有desmosomes deficiency小鼠，這些小鼠不能形成IOR嗎？
我們沒有嘗試desmosome小鼠，但是猜測可能需要做條件敲除？因?yàn)閐esmosome在胚胎發(fā)育過程中很重要，初步猜測如果desmosome形成不了的話，這個IOR區(qū)域可能是沒有的。在我們的研究中，IS段的IOR，可見形態(tài)有別于其他附睪區(qū)段，呈現(xiàn)長泡狀或者管段狀。猜測是由于IS里的desmosome分布和表達(dá)很少，后面幾個區(qū)段的desmosome分布和表達(dá)較多的緣故。
請問老師這個研究中整體實(shí)驗(yàn)工作流程您覺得最困難的是樣品制備或是電鏡成像和后續(xù)分析？
在本次實(shí)驗(yàn)中，最限速的步驟是重構(gòu)這一步，因?yàn)樵谧鲞@個研究的時候，還沒有AI輔助的功能，只能依靠學(xué)生手動挑選。特別是針對細(xì)胞膜的重構(gòu)，即便現(xiàn)在有了AI輔助，但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜對細(xì)胞膜在重構(gòu)上的影響很大，相對困難。樣品制備不難，數(shù)據(jù)收集需要一定技巧，也不難。其實(shí)是很多時間花在后期數(shù)據(jù)重構(gòu)上。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
3
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)