質(zhì)粒及細(xì)胞系構(gòu)建定制服務(wù)

質(zhì)粒（Plasimid），它是一種獨立于宿主染色體（擬核）之外的閉合環(huán)狀雙鏈DNA分子。它具有自主復(fù)制的能力，能夠在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，還能夠表達(dá)它所攜帶的遺傳信息。此外，質(zhì)粒載體通常攜帶抗性基因或報告基因，便于篩選和示蹤。這一系列特征使得質(zhì)粒在基因工程中具有較高的應(yīng)用價值。質(zhì)粒載體在基因表達(dá)調(diào)控中的作用如攜帶調(diào)控元件調(diào)控基因表達(dá)；實現(xiàn)誘導(dǎo)表達(dá)；實現(xiàn)基因沉默等等。

圖1：(a)染色體DNA和質(zhì)粒DNA示意圖；(b)真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒載體示例。

西安暉瑞可提供的質(zhì)粒構(gòu)建服務(wù)包括：

過表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建；

圖2：真核表達(dá)人源MAP3K8基因質(zhì)粒圖譜

（2）誘導(dǎo)基因的定點突變；（單堿基突變，多堿基突變）

（3）構(gòu)建基因截短體質(zhì)粒；

圖3：Stat3-full length和Stat3-delete Coiled-coiled domain截短體(紅框為缺失序列）示意圖

（4）亞克隆質(zhì)粒構(gòu)建；

圖4：將人源化FOXO1從pFlag-CMV4載體(a)中亞克隆至DOX誘導(dǎo)表達(dá)的PLVX-Tetone載體(b)

（5）通過慢病毒介導(dǎo)的基因過表達(dá)；

(b)

(c) 

圖5：(a)慢病毒包裝的三質(zhì)粒系統(tǒng); (b)Map3k8慢病毒侵染293T細(xì)胞24 h熒光圖片; (c)Western blot驗證蛋白表達(dá)成功。

（6）通過構(gòu)建shRNA慢病毒質(zhì)粒實現(xiàn)基因的敲減；

(b)

(c)

圖6：(a)DSC3-shRNA構(gòu)建到pGLV3-H1/GFP shRNA慢病毒載體中；(b)DSC3-shRNA慢病毒侵染C2C12細(xì)胞24 h明場和熒光圖片；(c)RT-qPCR驗證mRNA水平敲降；(d)Western blot驗證蛋白水平敲降。

（7）通過CRISPR-Cas9技術(shù)實現(xiàn)基因敲除。

圖7：(a)將STAT3-sgRNA構(gòu)建到lenti-CRISPR-V2慢病毒載體中；(b)Western blot驗證蛋白敲除成功。

以上過表達(dá)和敲除均可提供**穩(wěn)定細(xì)胞系