iPSC多能干細胞研究的基本流程和產品指南 -賽默飛

Thermo Fisher Scientific（賽默飛世爾科技）的相關產品覆蓋干細胞實驗研究中的每一步。從重編程體細胞到 iPSC 培養(yǎng)擴增、、基因編輯、分化與鑒定，為可靠的實驗結果提供保證。同時，賽默飛世爾科技也基于iPSC的治療策略開發(fā)過程中的每個階段（早期研發(fā)-臨床生產-商業(yè)化）提供解決方案。 

誘導多能干細胞（iPSC）目前的主要應用包括但不限于： 

· 基礎科學研究（疾病機制、發(fā)育生物學、細胞命運決定等） 

· 藥物開發(fā)與發(fā)現(xiàn)（為藥物的發(fā)現(xiàn)、鑒定和篩選、靶標驗證等提供生理相關細胞） 

· 毒理學篩查（用于評估活細胞內化合物或藥物的安全性） 

· 干細胞治療細胞療法（神經退行性疾病、免疫疾病、糖尿病等適應癥） 

· 類器官研究（iPSC來源的組織類器官） 

誘導性多能干細胞研究產品分步指南 

Step 1：重編程 

iPSCs通過特定轉錄因子的過表達，將體細胞重編程至多能性狀態(tài)而獲得。仙臺病毒具有兩大主要特點，使其成為重編程的優(yōu)選系統(tǒng)。首先，仙臺病毒可以通過黏附于多種不同類型細胞表面的唾液酸受體來感染細胞，因此可感染多種動物物種的細胞類型。其次，仙臺病毒是RNA病毒，從而不會被整合到宿主基因組中。而 Epi5 iPSC?episomal載體無需病毒包裝即可轉染至細胞內，適合于易于重編程的親本細胞，但需注意DNA載體可能會整合到宿主基因組中。 

產品推薦： 

Essential 8培養(yǎng)基——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+1000 

StemFlex培養(yǎng)基——PSC單克隆高效擴增 

CTS CytoTune-iPS 2.1仙臺病毒重編程試劑盒——高效重編程，提供法規(guī)支持文件 

Epi5™ Episomal iPSC 重編程試劑盒——不依賴病毒的重編程工具 

CytoTune-iPS 2.0仙臺病毒重編程試劑盒——高效重編程成纖維細胞和PBMC 

Step 2：培養(yǎng)擴增 

PSC 培養(yǎng)需要一整套兼容的培養(yǎng)基、基質和傳代方法，以支持細胞的健康生長和保持細胞的多能性。從最初的含血清培養(yǎng)體系，發(fā)展為feeder-free培養(yǎng)基體系，再到不含異源/動物源成分的臨床級別培養(yǎng)基體系，現(xiàn)在的PSC培養(yǎng)體系可靈活支持各種干細胞研究需求。同時，隨著藥物開發(fā)和治療的快速發(fā)展，研究人員開發(fā)出了懸浮培養(yǎng)方法，保證快速、經濟、穩(wěn)定的PSC大量擴增。 

產品推薦： 

StemFlex培養(yǎng)基——PSC單克隆高效擴增 

Essential 8培養(yǎng)基——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+1000 

Essential 8 Flex培養(yǎng)基——E8升級款，支持隔天換液 

Gibco™ CTS StemFlex培養(yǎng)基——更穩(wěn)健高效的干細胞治療生產工藝 

Gibco™ CTS Essential 8 培養(yǎng)基——不含動物源成分，提供法規(guī)支持文件 

CTS StemScale PSC懸浮培養(yǎng)基——不含異源成分，提供法規(guī)支持文件 

StemScale PSC懸浮培養(yǎng)基——無需微載體的3D懸浮培養(yǎng) 

Gibco™ KnockOut™血清替代物——批次間穩(wěn)定性高，30年的經典選擇 

KnockOut™ D-MEM培養(yǎng)基——批次間穩(wěn)定性高，PSC高效擴增 

截短型人重組玻連蛋白 (rhVTN-N) ——Essential 8經典搭配基質 

Gibco™ KnockOut™ DMEM/F-12培養(yǎng)基——批次間穩(wěn)定性高，PSC高效擴增 

Gletrex基質膠——批次間更一致的蛋白質濃度 

StemPro™ Accutase™ 細胞解離試劑——更溫和的干細胞解離試劑 

重組人層粘連蛋白rhLaminin-521——無需添加ROCK抑制劑的基質 

分散酶 II（中性蛋白酶）——相對溫和，適用于原代細胞的分離 

TrypLE™ Select 酶 (1X)，無酚紅——不含動物源成分，單細胞解離 

Countess 3系列自動細胞計數(shù)儀——準確、精密、省時 

Step 3：基因編輯 

PSC 的自我更新和分化能力使其非常適合構建疾病模型和細胞模型，用于藥物開發(fā)和細胞治療應用。通過化學轉染或者電轉Cas9蛋白復合體的方法，對PSC進行基因編輯進一步提升了其在科研和臨床領域的實用性，可實現(xiàn)復雜的遺傳疾病模型構建。使用Invitrogen TrueDesign 基因組編輯工具，免費設計5個物種中的6種基因編輯設計。 

產品推薦： 

TrueCut™ Cas9 v2——高編輯效率，ISO 13485質量標準 

Invitrogen™ TrueCut™ HiFi Cas9——低脫靶效應，高編輯效率 

Lipofectamine™ Stem 轉染試劑——多種干細胞中均實現(xiàn)高轉染效率 

Gibco™ TrueCut™ Cas9 蛋白——cGMP級別生產，提供法規(guī)支持文件 

Invitrogen™ TrueDesign 基因組編輯工具——5個物種、6種基因編輯設計 

CTS™ HiFi Cas9 Protein——cGMP級別生產，提供法規(guī)支持文件 

TrueGuide 合成 gRNA——經化學修飾，穩(wěn)定性高 

Neon NxT™ 電轉染系統(tǒng)——可靠的轉染性能 

Step 4：誘導分化 

當培養(yǎng)在特定的體系中（B-27/N2添加劑、生長因子、小分子），PSCs 可分化為特定的三胚層細胞譜系，包括神經元、心肌細胞、胰島細胞等體內其他任意細胞類型。 

產品推薦： 

經典款B-27添加劑——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+30,000 

Gibco™ B-27 Plus添加劑——更高的神經元存活率 

不含維生素A的B-27添加劑——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+30,000 

Gibco™ Neurobasal™ 培養(yǎng)基——維持高純度的神經元培養(yǎng) 

不含胰島素的B-27添加劑——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+30,000 

Gibco™ CTS B-27 XenoFree 添加劑——不含異源成分，提供法規(guī)支持文件 

Gibco™ N-2 添加劑——批次間穩(wěn)定高，文獻引用+30,000 

PeproTech細胞因子——重組蛋白和生長因子種類+1,000 

Gibco™ CTS B-27 XenoFree 添加劑——不含異源成分，提供法規(guī)支持文件 

PSC多巴胺能神經元分化試劑盒——高效的神經元分化 

PSC心肌細胞分化試劑盒——心肌細胞分化僅需8天，維持培養(yǎng)超15天 

PSC定形內胚層誘導試劑盒——2天內獲得定形內胚層細胞 

Step 5：分析鑒定 

鑒定在干細胞研究中是必要步驟，主要測試干細胞功能多能性，及是否存在可能影響細胞行為和安全的異常，除此之外，可能還需要鑒定來確定干細胞分化后形成的細胞類型。 

產品推薦： 

SuperScript IV VILO預混液——10分鐘快速完成反轉錄 

High-Capacity cDNA反轉錄試劑盒——動態(tài)范圍比同類試劑盒大10倍 

Invitrogen干細胞標記物抗體——嚴格兩步法驗證的高級驗證抗體 

Cells-to-CT™ 試劑盒——10分鐘內可完成96個RT-qPCR樣本制備 

Molecular Probes熒光標記和檢測試劑——文獻引用數(shù)量 

EVOS 智能活細胞成像分析系統(tǒng)——雙相機雙光路共聚焦顯微鏡系統(tǒng) 

iBright成像系統(tǒng)——910萬像素，4色熒光同時成像 

Invitrogen™ Attune™ CytPix™ 成像型流式細胞儀——聲波聚焦技術，6000張圖片/秒 

無論您是利用多能干細胞 （PSC） 進行基礎研究還是應用研究臨床轉化，PSC 培養(yǎng)基的性能和質量對于取得成功都至關重要。正因如此，賽默飛開發(fā)了一套創(chuàng)新、全面的 Gibco 干細胞培養(yǎng)基，支持多樣化的工作流程，使科學家能夠突破干細胞研究的界限。 

我們產品組合的廣度包括： 

· 適用于各種應用的解決方案—Gibco 培養(yǎng)基支持小鼠和人 PSC 培養(yǎng)。 

· 滿足挑戰(zhàn)性的應用需求—除常規(guī)干細胞培養(yǎng)之外，Gibco 培養(yǎng)基可用于基因編輯、疾病建模和細胞治療。 

· 高質量的 GMP 標準生產?—Gibco PSC 培養(yǎng)基在經過 ISO 13485 認證的設施中生產，并符合醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范 （GMP），以確保產品性能、一致性和可靠性。 

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