干細胞培養(yǎng)
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基是如何由Gibco Essential 8培養(yǎng)基的原始配方調整而來，以適應用戶更為靈活的培養(yǎng)時間安排？
成份明確的Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基配方經(jīng)專門優(yōu)化，能夠延長PSC培養(yǎng)時兩次換液的間隔時間。
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的產(chǎn)品設定與Gibco Essential 8 原始培養(yǎng)基有所不同么？
不是的，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與Gibco Essential 8 培養(yǎng)基的產(chǎn)品設定是相同的；也是基礎培養(yǎng)基與凍存的50X添加劑一并提供。
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基如何實現(xiàn)無需每日換液？
GibcoTM Essential 8 Flex培養(yǎng)基是在Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基的基礎上通過配方調整而得來，延長了PSC培養(yǎng)基中關鍵熱敏成份（包括FGF2）的活性。
使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基時，我每周幾天無需換液？
您最多可連續(xù)兩天不換液（如周六周日），每周最多三天不換液。
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的換液時間安排有多靈活？你們能例舉出一份換液時間表嗎？
在每周兩次傳代細胞的頻率下可觀察到最佳結果。此處以一份無需周末換液的培養(yǎng)時間表為例，用戶可在周一和周四分種細胞，并在傳代后24小時左右——即周二和周五進行一次培養(yǎng)基的更換。在該例中，周五換液添加的培養(yǎng)基應是標準體積的兩倍。 ?
我應何時開始使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基進行換液？
在每周初換用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基可觀察到最佳效果，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基常規(guī)用于已建立好的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)系統(tǒng)。
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與其他無需周末換液的PSC培養(yǎng)溶液有何區(qū)別？
不同于其他免除了周末換液操作的市售商品化PSC培養(yǎng)液，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基不需要為了避免換液而調節(jié)傳代細胞的比例。有了Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基，您就可維持一周兩次的分種安排并省去周末的換液操作了。 ?
你們仍推薦使用Gibco玻連蛋白作為Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的包被基質么？
Gibco 玻連蛋白（VTN-N）-截短型重組人源蛋白（Gibco Vitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, Truncated，貨號 A14700）與Gibco Geltrex 無LDEV，經(jīng)hESC驗證的低生長因子基底膜基質（Gibco Geltrex LDEV-Free, hESC Qualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix，貨號A1413301或A1413302）兩者均適用于Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基。 ?
Gibco 乙二胺四乙酸溶液是有效兼容Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的推薦解離試劑么？
Gibco 乙二胺四乙酸溶液（Gibco Versene Solution，貨號 15040066）與酶解離法均適用于傳代操作。
測試過哪些解離試劑與Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基兼容？
Gibco 乙二胺四乙酸溶液（貨號 15040066），Gibco TrypLE Select酶（Gibco TrypLE Select Enzyme，貨號 12563011）與Gibco StemPro Accutase細胞解離試劑（貨號 A1110501）均能兼容Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基。
在Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞時，我是否需要在傳代過程中加入ROCK抑制劑？
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與其他許多PSC培養(yǎng)基一樣，在使用乙二胺四乙酸溶液成集落傳代PSC細胞時，無需加入ROCK抑制劑。如果進行單細胞傳代，我們則推薦添加Gibco RevitaCell添加劑（貨號 A2644501）或其他ROCK抑制劑。
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的推薦傳代比例是多少？
傳代比例需基于您所使用的細胞系來確定。Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基通常能夠良好兼容1:3至1:12的分種比例。
使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基進行換液和傳代的時間應怎樣安排？
我們在每周兩次傳代細胞，鋪板24小時左右進行換液的條件下觀察到了結果。周一和周四進行傳代，周二和周五（雙倍培養(yǎng)基體積）換液結果最佳。
若嘗試從Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基切換至Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基，在配制培養(yǎng)基的方法上有什么不同？
Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的配制方法與Gibco Essential 8 原始培養(yǎng)基相同。差別在于換液的時間安排，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基所需的換液間隔時間更為靈活，可維持連續(xù)兩天無需換液。
我可以在Gibco Essential 8基礎培養(yǎng)基中加入Gibco Essential 8 Flex添加劑么？
不可以，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基是一個完整的試劑盒，其中基礎培養(yǎng)基與凍存添加劑需配套使用。Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的組份不應與Gibco Essential 8培養(yǎng)基的組份混合。
我能在37°C水浴中化凍Gibco Essential 8 Flex添加劑么？
不可以，GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑不宜在37°C水浴中化凍。在室溫條件下化凍1小時左右可獲得最佳結果。您也可在2–8°C條件下過夜化凍GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑，這樣的操作可能會產(chǎn)生少量沉淀物。沉淀物的存在不會對培養(yǎng)基使用效果產(chǎn)生負面影響。
在GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑的化凍過程中，我觀察到一些沉淀，我該怎么辦？
GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑中出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象是比較少見的；不過，即使發(fā)現(xiàn)有沉淀，也不會影響培養(yǎng)基的使用效果。如果您在添加劑中觀察到沉淀，請充分混勻后按常規(guī)操作將其加入GibcoTM Essential 8TM Flex基礎培養(yǎng)基中。
加入添加劑后的GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基保質期有多久？
為達到最佳效果，加入添加劑后的GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基建議兩周內用完。
日常使用時，我能在37°C水浴中溫育GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？
不可以，請勿在37°C條件下溫育GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基。
我能否在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中使用ROCK抑制劑？
可以，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中可添加ROCK抑制劑。我們推薦您使用GibcoTM RevitaCellTM添加劑（貨號 A2644501），該產(chǎn)品專為減少應激對PSC的影響而設計。
我能否使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基進行單細胞傳代？
可以，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基能夠兼容單細胞傳代操作。當您進行單細胞傳代時，請確保使用了GibcoTM RevitaCellTM添加劑（貨號 A2644501）或一些其他種類的ROCK抑制劑。
在使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的條件下，我能否頻繁調整換液時間表？
請選擇并保持規(guī)律的傳代和換液操作時間以得到的結果。舉例來說，如果您希望周末不換液，您可在周一/周四分種細胞，周二/周五進行換液。
我能否對培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中的細胞進行凍存？
可以，在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)的細胞可進行凍存和復蘇，相關操作與使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基一致。
我目前正在使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，我能方便地切換至GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？我能僅在周末離開時使用這款培養(yǎng)基么？
持續(xù)使用同款培養(yǎng)基培養(yǎng)您的PSC細胞將獲得最佳結果。從GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基切換至GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基是一個十分簡單的操作過程，您只需在一周開始時將細胞接種到GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中即可，在進入兩天不換液的間隔期之前，最好對細胞進行一次傳代操作。
我正在使用一款現(xiàn)有的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基，不過希望能免去周末的換液操作。我能僅在周末換用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？
由于持續(xù)使用單一的PSC培養(yǎng)基能夠幫助獲得最佳的培養(yǎng)效果，我們不推薦頻繁地將細胞從一種培養(yǎng)基直接切換至另一種。持續(xù)使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基能夠獲得最佳結果。
GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基與緩釋FGF2添加劑之間的區(qū)別是什么？
StemBeadsTM FGF2添加劑一類的緩釋產(chǎn)品能夠向生長培養(yǎng)基中釋放FGF2，從而補充隨時間而逐漸丟失的FGF2活性，而GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基則能夠避免FGF2的活性喪失。
StemBeadsTM FGF2添加劑的工作流程與GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的相比有何異同？
不同于StemBeadsTM FGF2添加劑，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基無需任何額外添加或優(yōu)化操作，即可有效限制FGF2的活性喪失。
我的細胞適應了GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基之后，穩(wěn)定的換液時間表和連續(xù)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)會對這些細胞有何長期影響？
我們在省略每天換液的條件下，使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)多種細胞系多達50代，未發(fā)現(xiàn)明顯影響。多能性標志物的表達（Tra-1-60，SSEA4，Sox2，Oct-4與Nanog），分化潛能與正常核型在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基長期培養(yǎng)的條件下均得到保持。
使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基時，我的細胞在兩天不換液間隔期中是否會累積廢物而產(chǎn)生不良效應？
和任何PSC培養(yǎng)一樣，使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基可能會出現(xiàn)一些細胞碎片和pH值的下降情況。不過，我們未發(fā)現(xiàn)這些累積的廢物對細胞生長或多能性方面造成長期的不良影響。
在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)細胞是否會對我的細胞的核型造成影響？
我們發(fā)現(xiàn)長期培養(yǎng)長達50代的多株PSC細胞系具有正常的核型。
我能否將GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長期培養(yǎng)的PSC用于后續(xù)的分化操作？
我們將細胞培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長達15代，未發(fā)現(xiàn)細胞的后續(xù)分化潛能受到任何影響。進行擬胚體分化和使用GibcoTM PSC神經(jīng)誘導培養(yǎng)基（貨號A1647801），GibcoTM PSC心肌細胞分化試劑盒（貨號A25042SA），GibcoTM PSC定形內胚層誘導試劑盒（貨號A27654SA）等產(chǎn)品進行分化均證明這些細胞擁有三系分化潛能。
我是否會在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中培養(yǎng)的兩批細胞之間觀察到形態(tài)差異？
培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中的細胞能夠保持PSC的正常形態(tài)，如緊湊均一的細胞克隆，清晰邊界和高核質比等特征。
你們是否在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)的PSC中觀察到多能標志物表達的某些改變？
我們在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)多株PSC細胞系超過50代，未觀察到多能標志物表達方面的顯著改變。
你們確認過GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)PSC的三系分化潛能么？
對于GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長期培養(yǎng)的細胞，其分化為外胚層，內胚層，中胚層譜系的潛力不受影響。這一結論是由擬胚體的自發(fā)分化實驗和神經(jīng)干細胞，心肌細胞和定形內胚層的定向分化實驗確認過的。
我能在重編程研究中使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？
我們將本品的使用結果與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配InvitrogenTM CytoTuneTM-iPS 2.0 仙臺病毒重編程試劑盒的實驗結果進行了比較，未發(fā)現(xiàn)重編程效率方面受到明顯影響。我們推薦在克隆形成階段每天進行換液（第7-28天）。
我能在基因編輯的工作流程中使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？
我們目前尚未就基因編輯操作開展GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的測試。
何為GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基？
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基是一種不含異源成份，無需飼養(yǎng)層的培養(yǎng)基產(chǎn)品，專為人源多能干細胞（PSC）的生長和增殖而配制。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基最初由James Thomson實驗室的Chen等（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）開發(fā)，并通過Cellular Dynamics International驗證；到目前為止已久經(jīng)測試，可維持多類PSC細胞系的多能性。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中有多少種成份？
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基僅含培養(yǎng)PSC所需的八種必需成份。本品最初由Chen等（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429).研發(fā)， 目的是為了克服mTeSRTM培養(yǎng)基中所發(fā)現(xiàn)的變異度問題。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中專門以不含白蛋白（BSA）的有限成份的設計減少變異度（參見下表）。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基為用戶準備了方便的兩組分試劑盒：500 mL GibcoTM Essential 8TM基礎培養(yǎng)基與10 mL GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基含有bFGF么？
是的。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中含有100 ng/mL堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），因此無需額外添加bFGF。
何為GibcoTM 玻連蛋白（VTN-N）？
GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）是按照人源玻連蛋白62-478號氨基酸片段設計，在大腸桿菌中表達的截短型人源重組蛋白。VTN-N經(jīng)內涵體純化和重新折疊，適合在人源PSC無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系作為基質使用（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）。當與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基聯(lián)用時，VTN-N經(jīng)驗證能夠幫助維持多種PSC細胞系的多能性和正常生長。
GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）與其他基底膜抽提物相比有何特點？
由于VTN-N是成份明確的人源重組蛋白，因此相比人血漿來源的玻連蛋白和標準基底膜抽提物（BME）而言，能夠有助于降低PSC培養(yǎng)的變異度。此外，VTN-N與全長的玻連蛋白及其他成份明確的基質相比更加經(jīng)濟和便于縮放PSC培養(yǎng)體系。
以GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）作為細胞生長基質使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的條件相比使用其他無飼養(yǎng)層系統(tǒng)而言，有哪些主要的區(qū)別需加以考慮？
以GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）作為細胞生長基質使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的條件相比使用其他無飼養(yǎng)層系統(tǒng)而言，有三個主要差別需要加以考量：
通常細胞的傳代時間比其他無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基提前24小時左右。
細胞在達到85%左右的匯合度時即需要傳代。如果細胞傳代時超過了85%的匯合度，細胞健康度及最終的細胞得率都會下降。
細胞應使用EDTA進行傳代。不推薦使用膠原酶或分散酶。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基是不含異源成份（僅人源或重組來源）的么？
是的。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基不含異源成份，是僅有8種成份的培養(yǎng)基，能夠為您提供健康和可靠的培養(yǎng)效果。
GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）是不含異源成份（僅人源或重組來源）的么？
是的。VTN-N是成份明確的人重組蛋白。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）能支持長期培養(yǎng)多能干細胞（PSC）么？
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與玻連蛋白經(jīng)證明能夠支持PSC的生長達50代以上而不會發(fā)生任何核型異常，同時這些PSC仍保持著分化為三胚層的能力。James Thomson實驗室Chen等報道（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429.），玻連蛋白的VTN-N變異體與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基聯(lián)用時相比野生型玻連蛋白能更好地支持人多能干細胞的貼壁和存活。。
不同批次的GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基之間會存在差異么？
相比現(xiàn)有其他種類的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的變異度更小。不同于其他含有超過20種高度變異性成份的培養(yǎng)基，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基在cGMP標準下生產(chǎn)，擁有配方和生長因子水平，能夠以最小的變異度幫助用戶獲得最大的細胞健康度，多能性和生長效果。
之前培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基和基質的多能干細胞（PSC）能換用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白進行培養(yǎng)么？
培養(yǎng)于其它無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的細胞，例如mTeSRTM培養(yǎng)基搭配MatrigelTM基底膜基質，或StemProTM hESC SFM搭配GeltrexTM基質，也能夠成功培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的體系中。此外，在飼養(yǎng)層細胞搭配KnockOutTM SR中培養(yǎng)的PSC經(jīng)證明也能夠培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的組合中。不過在更換培養(yǎng)基體系之前，細胞必須手工傳代或用EDTA進行傳代到GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的體系中。
之前凍存于其他培養(yǎng)條件的多能干細胞（PSC）能復蘇和后續(xù)培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合體系中么？
可以。在mTeSRTM培養(yǎng)基和BD MatrigelTM基底膜基質條件下培養(yǎng)并凍存的PSC細胞可用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基復蘇，再種到VTN-N基質包被的板上。某些細胞系使用凍存前的原生長培養(yǎng)基及基質進行復蘇可能效果會更好。在隨后的傳代過程中，使用EDTA將這些細胞傳代至GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和VTN-N的培養(yǎng)體系中。
在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基 和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的體系中培養(yǎng)的細胞外觀如何？
您預期可看到正常的多能干細胞（PSC）形態(tài)。PSC的預期生長形態(tài)是如圖所示的典型形態(tài)為，包括邊界清晰的緊密聚集克隆和高核質比。請參見下方第六次傳代時的PSC圖片。
我應如何配制GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基？
如需配置500 mL GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，請將GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）室溫化凍1小時，之后于無菌條件下將下列成份混合在一起：
我能使用其他版本的DMEM/F-12替代試劑盒中所提供的GibcoTM Essential 8TM基礎培養(yǎng)基么？
在配制GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基時，不能使用其他貨號的DMEM/F-12替代GibcoTM Essential 8TM基礎培養(yǎng)基。試劑盒中提供的GibcoTM Essential 8TM基礎培養(yǎng)基含有更高濃度的碳酸氫鈉。
我能在37°C水浴中解凍GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）么？
最好在室溫化凍1小時來化凍此款添加劑。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的保質期有多久？
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的保質期為2–8°C條件下放置兩周。
日常使用時，我能在37°C水浴中溫育GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基么？
非常重要的是，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基需放置在室溫下進行平衡，請勿在37°C水浴中平衡。bFGF活性會在從4°C至37°C的溫度反復改變中迅速降低。
Rho相關蛋白激酶（ROCK）抑制劑適用于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基么？
是的。不過，該抑制劑并不是必需的，我們內部不會日常使用這些抑制劑。如需使用Rho相關蛋白激酶（ROCK）抑制劑，您可只在傳代時的培養(yǎng)基中進行添加。常規(guī)換液操作時不應添加這類抑制劑。請基于具體情況進行添加，常規(guī)細胞培養(yǎng)無需添加這些抑制劑。
Rho相關蛋白激酶（ROCK）抑制劑或blebbistatin的作用是什么？
加入ROCK抑制劑（HA100或Y27632）或Blebbistatin能夠在初始期促進細胞存活，并支持高的克隆形成效率，加入轉鐵蛋白和硒元素也能夠提高克隆形成效率。如果常規(guī)培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基中包含了這一類ROCK抑制劑，那么可能就有必要在日常培養(yǎng)中持續(xù)加入抑制劑。
在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞時，我能否采用比其他無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基更低的換液頻率？
不可以。除傳代的當天之外，細胞都應每天換液。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合中推薦用怎樣的方法進行細胞傳代？
培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與VTN-N組合中的細胞應使用EDTA進行傳代。
在使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合開展細胞培養(yǎng)時，我能否使用分散酶和膠原酶等酶類進行傳代？
分散酶與膠原酶一類的酶并不適用于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合。使用這些酶類傳代會導致細胞活力和貼壁能力下降。
你們推薦使用何種EDTA濃度進行傳代？
我們推薦您使用以不含鈣或鎂的Dulbecco氏磷酸緩沖鹽溶液（DPBS）制備的 0.5 mM EDTA溶液。（貨號14190-144（在歐洲，貨號為14190-094））
采用EDTA作為解離試劑時，理想的孵育時間是多久？
EDTA的理想孵育時間為37°C條件下4-5分鐘。當細胞開始分離變圓，顯微鏡下即可觀察到克隆中開始出現(xiàn)空洞，這時它們已經(jīng)很容易從器皿上解離下來了（圖A，下方）。我們不推薦您讓細胞克隆過度分散，如下方圖B所示。
圖A
圖B
我能否在室溫條件下使用EDTA孵育細胞？
可以，EDTA可在室溫下使用，不過孵育時間可能會略微延長，時間約為5-8分鐘。
推薦的傳代比例是多少？
由于EDTA具有不同于分散酶和膠原酶的解離屬性，解離下來的克隆尺寸（使用EDTA）會明顯小一些，因此應對傳代比例進行調整以獲得最佳的培養(yǎng)條件。細胞達到85%左右匯合度的時候即可傳代，通常為第四天。有時細胞在第三天即應傳代。使用EDTA進行傳代的典型比例是1:6,1:8或1:10。用戶應對傳代比例進行調整，從而確保細胞不要過早或過晚進行傳代。
在常規(guī)傳代過程中，可使用PBS潤洗細胞么？
使用EDTA對人PSC進行傳代的過程中，加入EDTA之前一定要使用不含鈣鎂的DPBS潤洗細胞。
細胞可凍存于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中么？
可以，細胞可常規(guī)凍存于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基+10% DMSO中。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中的胰島素有何作用？
胰島素對于細胞的存活與增殖至關重要。
L-抗壞血酸的作用是什么？
L-抗壞血酸（維生素C）能夠促進人胚胎干細胞與iPSC的增殖和擴增。
硒元素的作用是什么
硒對于維持培養(yǎng)條件是必需的。
轉鐵蛋白的作用是什么？
加入轉鐵蛋白能夠提升初期細胞的存活并支持高的克隆形成效率。
TGFβ的作用是什么？
加入TGFβ能夠增加NANOG的表達，并幫助維持人PSC培養(yǎng)的長期穩(wěn)定性。
源自皮膚活檢樣本的成纖維細胞能否培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中，以實現(xiàn)無異源成份的培養(yǎng)條件？
可以，源自皮膚活檢樣本的成纖維細胞可在添加有EGF，凝血酶和皮質醇的GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中培養(yǎng)和增殖（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429.）
為何即使在膠原酶IV的分離時間（37°C條件下30-60分鐘，實際效果視特定批次而定）比分散酶更長的情況下，也最好使用IV型膠原酶而不是分散酶？
實際上，在基于飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系中，分散酶（2 mg/mL）需要37°C條件下進行15-25分鐘的孵育。無飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系需2-3分鐘的解離時間。分散酶是一種更強烈的酶，所以起效更快，但也意味著當收獲PSC細胞團時，它們對后續(xù)的吹打更為敏感。在收獲細胞團時，它們會被上下吸取數(shù)次，從而形成適當大小的團塊。如果應用IV型膠原酶收獲細胞，則由于細胞團更難分解，可施加更多次數(shù)的吹打，不過這也意味著細胞團不至于被解離成非常小的團塊。如果采用分散酶收獲細胞，它們需吹打的次數(shù)更少，用戶也需要多加小心，不要將細胞團分散過度。兩種酶的使用效果均不錯，如果您擁有足夠的經(jīng)驗，您可能更喜歡使用分散酶節(jié)省操作時間。但對于經(jīng)驗不足的用戶，我們推薦您使用IV型膠原酶，因為它更為安全，過度吹打造成培養(yǎng)物損傷的可能性也更小。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于任何種類的PSC生長培養(yǎng)基么？
我們測試和確認了適用于下列PSC生長培養(yǎng)基：GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，GibcoTM StemProTM hESC SFM，mTesR1TM培養(yǎng)基和含有GibcoTM KnockOutTM血清替代物（KSR）的飼養(yǎng)層依賴的培養(yǎng)基。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于哪些種類的PSC？
我們僅在人源PSC上進行了測試。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于哪些種類的原代細胞？
我們僅在下列人類細胞（角膜上皮細胞，角質形成細胞，外周血單核細胞）和大鼠皮層神經(jīng)元上進行了測試。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑能應用于飼養(yǎng)層上培養(yǎng)的iPSC么？還是僅推薦用于無飼養(yǎng)層的iPSC培養(yǎng)？
兩種應用均通過了相關測試。
在無飼養(yǎng)層的培養(yǎng)操作中，GibcoTM RevitaCellTM添加劑能夠兼容何種無飼養(yǎng)層的基質？
GibcoTM RevitaCellTM添加劑經(jīng)測試能夠兼容GibcoTM GeltrexTM基質，GibcoTM玻連蛋白，LN-521TM干細胞基質和iMatrix-511。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑可否應用于添加血清的培養(yǎng)基中，以培養(yǎng)原代細胞？
我們尚未測試此種應用。
GibcoTM RevitaCellTM添加劑能與傳統(tǒng)的ROCK抑制劑共用么？
不可以。GibcoTM RevitaCellTM添加劑與傳統(tǒng)的ROCK抑制劑聯(lián)用時會對PSC造成不良影響。
細胞凍存前是否需要用GibcoTM RevitaCellTM添加劑預處理24小時？
不可以，這樣的預處理對細胞有害。
電轉操作后，GibcoTM RevitaCellTM添加劑能否幫助細胞復原？
是的，這一應用通過了iPSC測試。不過，原代細胞未進行相關測試。
何為PSC凍存試劑盒？
PSC凍存試劑盒包含了無異源成份的PSC凍存培養(yǎng)基——該產(chǎn)品是用于凍存早期傳代的多能干細胞（PSC）的即用型溶液，以及GibcoTM RevitacellTM添加劑（100X）——應用于解凍后培養(yǎng)基的化學成份明確的復蘇添加劑。這些試劑組合使用時，有助于將細胞活力的喪失降至最小，使細胞復蘇后的恢復，并盡可能減少PSC不期望的分化情況發(fā)生。本試劑盒也可用于凍存和復蘇外周血單核細胞（PBMCs ），增強其復蘇后的細胞活力及恢復情況。
可對PSC凍存試劑盒中提供的凍存培養(yǎng)基進行分裝和重新冷凍保存么？
我們尚未嘗試此種操作。不過，這款培養(yǎng)基可在4度條件下穩(wěn)定保存6個月。我們的研發(fā)部門認為本品中的各種成份均不會受凍融過程的很大影響；不過，這一操作確實未經(jīng)正式測試。
GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中bFGF的作用是什么？
bFGF對于細胞的存活與增殖至關重要。
有哪些細胞系在無飼養(yǎng)層培養(yǎng)條件下通過了GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的測試？
有多株多能干細胞（PSC）系通過了GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的測試（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）。
重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）能否與 Essential 8™ Flex 培養(yǎng)基一起使用？
可以。為確保單細胞傳代后多能干細胞（PSCs）的最佳回收率，在傳代前一天，應用 Essential 8™ Flex 培養(yǎng)基培養(yǎng) PSCs。
重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）能否以低于 0.5μg/cm2 的包被濃度使用？
rhLaminin - 521 的最佳工作濃度取決于細胞系，必須通過實驗確定。不過，對于某些細胞系，低至 0.3μg/cm2 的包被濃度使用時，性能也不會下降。此外，在 4℃下包被培養(yǎng)板過夜，可支持低至 0.1μg/cm2 的包被濃度。
從 feeder 依賴培養(yǎng)體系中轉移到重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）上的 Essential 8™培養(yǎng)基中的 PSCs，能否再轉移到玻連蛋白（VTN - N）上？
可以。在 rhLaminin - 521 基質上傳代 2 次后，應使用 Versene 或 EDTA 傳代 PSCs。
重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）預包被板必須始終被液體覆蓋嗎？
是的，不要讓培養(yǎng)板上的層粘連蛋白干燥。
重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）在使用前必須放在冰上嗎？
我們建議在準備使用該產(chǎn)品時，將其放在冰上。
在重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）包被的培養(yǎng)板上，能否使用 EDTA 或 versene 對干細胞進行傳代？
可以使用 EDTA 或 versene。但是，不建議使用 dispase（分散酶）或 collagenase（膠原酶），因為這可能會導致細胞分化。
多物種 KnockOut 血清替代物（產(chǎn)品編號：A3181501 和 A3181502）與 KnockOut 血清替代物（產(chǎn)品編號：10828010 和 10828028）有區(qū)別嗎？
這兩種產(chǎn)品的配方相同。多物種 KnockOut 血清替代物是僅用于研究的產(chǎn)品，設計用于基礎研究應用，而 KnockOut 血清替代物推薦用于臨床前和臨床應用。
如果我目前正在使用 KnockOut 血清替代物，能否換成多物種 KnockOut 血清替代物？
可以。如果為基礎研究應用而換成多物種 KnockOut 血清替代物，您對該產(chǎn)品的使用體驗幾乎不會有變化，而且不需要監(jiān)管文件（或醫(yī)療器械許可）。
多物種 KnockOut 血清替代物能經(jīng)歷多少次凍融循環(huán)？
該產(chǎn)品最多可經(jīng)歷 1 次凍融循環(huán)，因此建議解凍小瓶后，分裝成單次使用的量再冷凍。
解凍后的多物種 KnockOut 血清替代物在 4℃下儲存的穩(wěn)定性如何？
該產(chǎn)品在 4℃下避光儲存時，穩(wěn)定性可達 4 周。
從小鼠（ICR）滅活成纖維細胞分離所得的小鼠胚胎的性別是什么？
我們沒有確定胚胎的性別。這些胚胎來自多個同窩幼鼠，是雄性和雌性的混合體。
接種小鼠胚胎成纖維細胞（包括小鼠（ICR）滅活成纖維細胞）之前，培養(yǎng)容器需要包被嗎？
是的，培養(yǎng)容器需要用附著因子蛋白（產(chǎn)品編號：S006100）在 37℃下包被 30 分鐘，或在室溫下包被 2 小時。包被后的容器可立即使用，或在室溫下儲存長達 24 小時。
小鼠胚胎成纖維細胞應在何時接種，這些細胞能使用多久？
這些細胞應在接種胚胎干細胞（ESCs）或誘導多能干細胞（iPSCs）前 24 小時接種，且只能使用 7 - 10 天。
小鼠胚胎成纖維細胞的推薦接種密度是多少？為什么接種密度很關鍵？
我們推薦這些細胞的接種密度范圍為 2×10?至 5.5×10?個細胞 /cm2。一個不錯的起始點是 3×10?個細胞 /cm2。如果飼養(yǎng)細胞過于稀疏，可能無法維持多能細胞的未分化狀態(tài)，而且多能細胞可能無法很好地附著。如果飼養(yǎng)細胞過于密集，飼養(yǎng)層可能會從培養(yǎng)板上脫落，導致培養(yǎng)失敗。
CF1、CF6 和 DR4 小鼠胚胎成纖維細胞有什么區(qū)別？
CF1 小鼠胚胎成纖維細胞沒有藥物抗性。CF6 小鼠胚胎成纖維細胞對新霉素 / 遺傳霉素（G418）有抗性。DR4 小鼠胚胎成纖維細胞對遺傳霉素（G418）、嘌呤霉素、潮霉素和 6 - 硫鳥嘌呤有抗性。
重構后的 StemFlex 培養(yǎng)基能否分裝冷凍后供以后使用？
可以。重構后的完整 StemFlex 培養(yǎng)基可分裝并在 - 5 至 - 20℃下儲存長達 6 個月?；蛘撸部蓪⒀a充劑分裝并在 - 5 至 - 20℃下儲存長達 6 個月。要避免多次凍融循環(huán)。
我已經(jīng)制備了 1X 重構的 StemFlex 培養(yǎng)基分裝，并將其冷凍在 - 20℃。能否在 37℃水浴中解凍這種重構的培養(yǎng)基？
不可以。我們建議在室溫下或在 2 - 8℃下過夜解凍分裝的培養(yǎng)基。
在 StemFlex 培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)多能干細胞（PSCs），推薦使用什么傳代方法？
在 StemFlex 培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng) PSCs，推薦使用 Versene 傳代法。
在 StemFlex 培養(yǎng)基中進行單細胞傳代時，需要使用 ROCK 抑制劑嗎？
在 rhLaminin - 521 上用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)時，不需要使用 ROCK 抑制劑。不過，在單細胞傳代等應激轉換過程中，補充 RevitaCell 補充劑可為 PSCs 提供額外支持。
如果我對 StemFlex 培養(yǎng)基的周末免換液培養(yǎng)方案不感興趣，還能每天給細胞換液嗎？
StemFlex 培養(yǎng)基可適應大多數(shù)換液方案，包括每天換液和周末免換液方案。
你們推薦 Geltrex 作為 StemFlex 培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)的基質。我也能使用玻連蛋白或重組人層粘連蛋白 - 521 嗎？
可以。我們建議遵循玻連蛋白或 rhLaminin - 521 的包被說明，并采用 StemFlex 方案中的培養(yǎng)和傳代建議。
StemFlex 培養(yǎng)基是無異種成分的嗎？
StemFlex 培養(yǎng)基的配方中含有牛血清白蛋白（BSA），因此不被認為是無異種成分的。與 mTeSR1 相比，它的成分更明確，因為其配方中含有的物質更少。Essential 8 和 Essential 8 Flex 被推薦為用于多能干細胞培養(yǎng)的成分最明確且無異種成分的培養(yǎng)基。
StemFlex 培養(yǎng)基與 mTeSR 和 TeSR - E8 相比如何？
StemFlex 培養(yǎng)基比 TeSR - E8 更穩(wěn)定，但成分比 mTeSR 少。在許多應用中，如單細胞傳代、基因編輯和重編程，StemFlex 培養(yǎng)基的性能被證明優(yōu)于 mTeSR1。
我目前正在使用 mTeSR1。讓我的細胞適應 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)難度大嗎？
這種轉換非常簡單。我們建議至少經(jīng)過 2 次傳代，使細胞轉換到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。簡單來說，如果您有之前在 mTeSR1 / 基質膠系統(tǒng)中培養(yǎng)的冷凍細胞，建議將細胞解凍后放回 mTeSR1 / 基質膠中，直到恢復。當細胞匯合度達到約 70% - 85% 時，使用 Versene 溶液傳代，并直接接種到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。
在其他無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基系統(tǒng)中培養(yǎng)后冷凍的多能干細胞（PSCs），能否直接解凍到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中？
可以。在其他培養(yǎng)基系統(tǒng)中培養(yǎng)后冷凍的 PSCs 可直接解凍到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。不過，某些細胞系可能更適合先解凍到冷凍時所用的培養(yǎng)基和底物中，然后在下次傳代時，使用 Versene 溶液將細胞傳代到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。
對于在 StemFlex 培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多能干細胞（PSCs），推薦采用什么方案遞送 Cas9 蛋白：向導 RNA 復合物？
我們推薦使用 Neon 電穿孔裝置，按照以下已驗證方案中 “通過 Neon 轉染系統(tǒng)電穿孔 RNP 進行敲除" 部分的指導，對 PSCs 進行 Cas9 蛋白：向導 RNA 復合物的電穿孔。我們發(fā)現(xiàn)，Neon 電穿孔方案 7 和 14 能在保持細胞存活的同時，實現(xiàn)最佳的插入缺失形成。不過，可能需要針對您的多能細胞系優(yōu)化電穿孔條件。
在基因編輯 / 流式分選實驗中，為防止污染，能否在 StemFlex 培養(yǎng)基中使用抗生素？
可以。我們使用抗生物素 - 抗真菌素（產(chǎn)品編號：15240062）來進一步防止污染。
使用 StemFlex 培養(yǎng)基時，為了多能干細胞（PSCs）的克隆擴增，在 96 孔板的每個孔中接種 1 - 5 個細胞，推薦采用什么換液方案？
我們建議每 3 天給細胞換液一次，即使在含有 RevitaCell 補充劑的情況下，培養(yǎng)約 14 天也是如此。
在克隆擴增流程中，當在 96 孔板的每個孔中接種 1 - 5 個細胞時，我能使用 Geltrex 基質代替 rhLaminin - 521 嗎？
我們尚未評估在 StemFlex 培養(yǎng)基存在的情況下，使用 Geltrex 基質進行克隆擴增的效果。不過，rhLaminin - 521 在單細胞傳代后能為細胞提供最佳的存活條件，因此推薦這種基質用于此類關鍵應用。
StemFlex 培養(yǎng)基與賽默飛世爾科技的下游分化試劑盒兼容嗎？
可以。我們已證實它與賽默飛世爾科技的以下分化試劑盒兼容：多能干細胞心肌細胞分化試劑盒（產(chǎn)品編號：A2921201）、多能干細胞定型內胚層誘導試劑盒（產(chǎn)品編號：A3062601）、多能干細胞神經(jīng)誘導培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：A1647801）和多能干細胞多巴胺能神經(jīng)元分化試劑盒（產(chǎn)品編號：A3147701）。
能否使用 Essential 7 或 Essential 8 培養(yǎng)基重編程體細胞，并在收獲后將其轉移到 StemFlex 培養(yǎng)基中？
可以。如果需要提高重編程效率，您可以使用 Essential 7（Essential 6 + 堿性成纖維細胞生長因子）或 Essential 8 培養(yǎng)基重編程體細胞，并直接將其轉移到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。
我有興趣在體細胞重編程中使用 StemFlex 培養(yǎng)基。對于人成纖維細胞，應遵循什么方案？
我們已評估過使用 Cytotune - iPS 2.0 仙臺重編程試劑盒（產(chǎn)品編號：A16517）對新生兒和成人真皮成纖維細胞進行體細胞重編程的效果。對于成纖維細胞，請按照 Cytotune 2.0 重編程手冊中關于無飼養(yǎng)層重編程的說明（第 16 - 20 頁）進行操作。在第 7 天，您可以使用重組人 VTN - N（產(chǎn)品編號：A14700）、Geltrex 基質（產(chǎn)品編號：A1413302）或重組人層粘連蛋白 - 521（產(chǎn)品編號：A29248 或 A29249）。從第 8 天起，不必每天用 Essential 8 培養(yǎng)基培養(yǎng)，我們建議每隔一天用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)重編程的成纖維細胞。
我有興趣在體細胞重編程中使用 StemFlex 培養(yǎng)基。對于血細胞，應遵循什么方案？
我們已評估過使用 Cytotune - iPS 2.0 仙臺重編程試劑盒（產(chǎn)品編號：A16517）對 CD34 + 血細胞進行體細胞重編程的效果。對于 CD34 + 細胞，請按照 Cytotune 2.0 重編程手冊中關于無飼養(yǎng)層重編程的說明（第 39 - 44 頁）進行操作。在第 3 天，您可以使用重組人 VTN - N（產(chǎn)品編號：A14700）、Geltrex 基質（產(chǎn)品編號：A1413302）或重組人層粘連蛋白 - 521（產(chǎn)品編號：A29248 或 A29249）。從第 8 天起，不必每天用 Essential 8 培養(yǎng)基培養(yǎng)，重編程的 CD34 + 細胞應每隔一天用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)。
StemFlex 培養(yǎng)基是否經(jīng)過小鼠胚胎干細胞（mESCs）生長的評估？
StemFlex 培養(yǎng)基含有堿性成纖維細胞生長因子，已證明會導致小鼠胚胎干細胞（mESCs）分化為小鼠來源的上胚層干細胞（mEpiSCs）。此外，mESCs 對白血病抑制因子（LIF）有依賴性。因此，不推薦將 StemFlex 培養(yǎng)基用于 mESCs 的培養(yǎng)。
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