人β-hCG ELISA 試劑盒技術參數：把數字翻譯成實驗決策

1. 檢測限 ≠ 功能靈敏度：0.5 mIU/mL 背后的算法

說明書寫靈敏度 0.5 mIU/mL，來自 20 個零孔平均信號+3SD。真把零標準品反復測 10 次，濃度落在 0.4–0.6 mIU/mL 區(qū)間，批間波動 18 %。

實驗室內部用“功能靈敏度"：連續(xù) 3 天測低值血清，CV≤20 % 的低濃度點，多數盒子落在 1.2–1.5 mIU/mL。低于 1 mIU/mL 的數值只能當“趨勢"，不能當“差異"。

2. 線性范圍：1–1000 mIU/mL 的“隱形天花板"

廠家標 1–1000 mIU/mL，把 1500 mIU/mL 高值樣本 1∶2 稀釋回算，偏差 35 %，說明鉤狀效應起點在 1200 mIU/mL 左右。

現場驗證：

• 取 2000 mIU/mL 血清做 1∶2、1∶4、1∶8 梯度，回算值偏差 ≤15 % 的最高稀釋點即“實測上限"，多數批次只能穩(wěn)到 800 mIU/mL。

• 報告高值時統一用 1∶4 稀釋，把結果乘 4，避免平臺區(qū)誤讀。

3. 特異性：CGB3、CGB5、CGB7 一鍋端

抗體識別位點落在 β 亞基第 47–55 氨基酸，CGB3、CGB5、CGB7 同源性 98 %，交叉反應 100 %。

干擾實驗：

• α-hCG 500 mIU/mL 摻入，測值升高 < 0.3 %。

• LH（300 mIU/mL）、FSH（1000 mIU/mL）、TSH（500 μIU/mL）交叉 < 0.1 %。

• 類風濕因子 400 IU/mL 造成假陽 12 mIU/mL，需追加 0.5 % HBR（Heterophilic Blocking Reagent）中和。

4. 精密度：批內 CV 目標 5 %，不是喊口號

實驗設計：

• 1 塊板內插 3 個濃度 QC（低 15、中 150、高 600 mIU/mL），各 20 復孔。

• 低值 CV 要求 ≤8 %，中高值 ≤5 %。

• 若高值 CV 超標，優(yōu)先檢查洗板機殘液量；低值 CV 超標，多數是移液器 10 µL 刻度不準，換一次性加樣槽再測。

5. 回收率：90–110 % 的金區(qū)

操作：

• 基礎血清 10 份，β-hCG 濃度 < 2 mIU/mL，每份加 50、200、400 mIU/mL 標準品，體積比 9∶1。

• 回收率 88 % 提示基質蛋白吸附，把稀釋液換成 5 % 胎牛血清-PBS，回收率拉到 96 %。

• 回收率 125 % 提示存在補體干擾，56 ℃ 滅活 30 min 再測，數值回落到 105 %。

6. 校準品溯源：WHO 5th IS 與舊批差值

2022 年 WHO 發(fā)布 5th IS 21/100，單位比 4th IS 高 3.2 %。

新舊換批：

• 同時用舊批試劑盒測 30 份覆蓋 10–800 mIU/mL 血清，線性回歸斜率 0.968，截距 2.1 mIU/mL。

• 實驗室自建參考區(qū)間需乘校正系數 1.032，再發(fā)報告，避免臨床誤判“假上升"。

7. 穩(wěn)定性：37 ℃ 7 天加速實驗

數據：

• 校準品偏差 6 %，QC 低值漂移 +9 %，高值 ?3 %。

• 酶結合物活性下降 15 %，背景 OD 升高 0.025。

• 結論：運輸箱溫度偶爾沖 37 ℃ 不超過 48 h，結果仍可接受；超 72 h 直接報廢。

8. 板間差：48 塊板的大區(qū)實驗

設計：

• 3 個試劑批、48 塊板、6 個實驗室、5 天完成。

• 統一用 30、150、750 mIU/mL 質控品，每日每板各 4 復孔。

• 結果：總 CV 6.2 %，其中批間貢獻 3.8 %，日間 2.1 %，板間 1.7 %。

• 提示：多中心項目務必統一校準品批號，批間差占大頭，換批即重做標準曲線。

9. 參數速查表