MICB 高度多態(tài)，胞外 α1α2 平臺(tái) 5 個(gè)經(jīng)典位點(diǎn)決定抗體結(jié)合角度。實(shí)驗(yàn)室常用的是 *004:01（胞外 83-215aa），但腫瘤系普遍攜帶 *008（Arg145Gly），導(dǎo)致商品化抗體 6D4 識(shí)別效率掉 40%。下單前先做細(xì)胞 STR 鑒定，把等位基因?qū)戇M(jìn)采購(gòu)備注，能省一次 3000 塊的重復(fù)訂單。
C-His：適合夾心 ELISA，檢測(cè)限 8 pg/mL，但金屬螯合層析時(shí) α2 域容易部分解折疊，下游做 BLI 會(huì)出現(xiàn)批量漂移。
N-Avi-His：生物素定點(diǎn)標(biāo)記，一步法純化后 DLS 多分散指數(shù) <0.08，適合流式微球定量。
無標(biāo)簽：晶體學(xué)黃金標(biāo)準(zhǔn)，純度 ≥98%，得率只有帶標(biāo)簽的 1/3，預(yù)算要乘以 2.5 倍。
| 克隆 | 表位 | 應(yīng)用沖突 |
|---|---|---|
| 6D4 | α1 62-70aa | 與 NKG2D-Fc 阻斷實(shí)驗(yàn)沖突，IC50 曲線右移 3 倍 |
| 2F9 | α2 148-156aa | 可做雙染，與 B7-H6 抗體共定位無交叉 |
| 3H3 | 糖基化依賴 | 不能用于去糖基化 Western，信號(hào)直接消失 |
提示：做腫瘤微環(huán)境雙染，直接選 2F9-AF647 + CD45-AF488，補(bǔ)償矩陣一次性通過，不用反復(fù)調(diào)電壓。
人基因組 AluY 在 MICB 3'UTR 有 218 bp 同源段，常規(guī)引物容易擴(kuò)出非特異條帶。設(shè)計(jì)時(shí)把反向引物放在 3'UTR 末端 25 bp 外，Tm 差控制在 1 °C 以內(nèi)，擴(kuò)增效率 98%，SD 0.08。探針選 FAM-BHQ1，拷貝數(shù)線性區(qū)間 102–10?，避免 Ct 值 35 以后還在硬算。
凍干微球 4 °C 運(yùn)輸，重懸后 CV<5%，但復(fù)溶 4 h 內(nèi)不用完活性掉 20%。液體微球 -80 °C 托運(yùn)，干冰費(fèi)用 600 元/次，適合高通量平臺(tái)；小實(shí)驗(yàn)室月用量 <200 測(cè)試，直接選凍干，平均下來單個(gè)樣本省 4 塊。
行業(yè)默認(rèn)批次間熒光強(qiáng)度 CV≤8%，但 MICB 抗原表位依賴糖基化，不同批次昆蟲細(xì)胞表達(dá)譜有漂移。合同里加一條：到貨 7 日內(nèi)做流式 SOP 校準(zhǔn)，CV>8% 直接整批退換，運(yùn)費(fèi)廠家承擔(dān)。過去三年統(tǒng)計(jì)，能攔下 12% 的隱性次品。
市面上有按 µg 計(jì)價(jià)、按反應(yīng)數(shù)計(jì)價(jià)、按板計(jì)價(jià)三種模式。換算成 1000 測(cè)試：
µg 模式：需要 200 µg，單價(jià) 1800 元/100 µg，總價(jià) 3600 元
測(cè)試數(shù)模式：1000 測(cè)試 2200 元，送 100 測(cè)試質(zhì)控品
板模式：5 塊 96 孔板 2800 元，拆開后 30 天用完，過期報(bào)廢 15%
結(jié)論：月樣本量 >800 選測(cè)試數(shù)，<300 選 µg 模式，中間值選板模式會(huì)剩半板，浪費(fèi)比高達(dá) 22%。
掃碼批號(hào)，比對(duì) COA，確認(rèn)糖基化譜圖無新增雜峰
取 5 µL 微球 + 50 ng 6D4 抗體，流式 30 s，熒光強(qiáng)度落在參考值 ±10%
打開 Gitter 云記錄，自動(dòng)上傳數(shù)據(jù)，廠家后臺(tái) 24 h 內(nèi)給出電子簽章，質(zhì)保期從簽章日起算
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