一文讀懂乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒

一、乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒概念

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒是一種用于定量檢測(cè)生物樣本(如血清、血漿、細(xì)胞裂解液等)中乳酸脫氫酶活性的生物化學(xué)試劑套裝。

核心用途：

LDH活性是臨床醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究中一個(gè)非常重要的標(biāo)志物。檢測(cè)它的主要意義在于：

在臨床上：作為細(xì)胞損傷或死亡的“警報(bào)器”。當(dāng)細(xì)胞受損(如心肌梗死、肝炎、溶血、惡性腫瘤)時(shí)，LDH會(huì)從細(xì)胞中釋放到血液中，導(dǎo)致血清LDH活性升高。

在科研中：常用于評(píng)估細(xì)胞毒性(如藥物、毒素的作用)、細(xì)胞增殖情況，以及研究細(xì)胞代謝狀態(tài)。

二、檢測(cè)原理：它是如何工作的?

目前絕大多數(shù)試劑盒都采用國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)推薦的連續(xù)監(jiān)測(cè)法，其原理基于LDH催化的可逆化學(xué)反應(yīng)。我們通常檢測(cè)的是正向反應(yīng)，即乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸。

反應(yīng)步驟如下：

主反應(yīng)(LDH催化)

乳酸 + NAD? → 丙酮酸 + NADH + H?

LDH酶催化乳酸脫氫，生成丙酮酸，同時(shí)使氧化型輔酶I轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶I。

指示反應(yīng)(與主反應(yīng)偶聯(lián))

生成的丙酮酸會(huì)立即與反應(yīng)體系中的另一種物質(zhì)——2,4-二x基苯肼發(fā)生反應(yīng)，生成丙酮酸二x基苯腙。

注意：在一些更現(xiàn)代、更直接的試劑盒中，這一步可能被另一種偶聯(lián)反應(yīng)替代，但基本原理相通。

比色測(cè)定

丙酮酸二x基苯腙在堿性條件下呈棕紅色，且顏色的深淺與生成的丙酮酸量成正比，進(jìn)而與LDH的活性成正比。

通過在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度的變化速率，就可以計(jì)算出LDH的活性單位(通常為 U/L 或 U/mg prot)。

簡(jiǎn)單理解：樣本中的LDH越多(活性越高)，反應(yīng)生成的有色物質(zhì)就越多，溶液顏色就越深，儀器測(cè)出的吸光度值變化就越快。

三、試劑盒典型組成

一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的LDH檢測(cè)試劑盒通常包含以下核心組分：

組分名稱作用

緩沖液：提供最適且穩(wěn)定的pH環(huán)境(通常為弱堿性)。

底物液：含有LDH反應(yīng)的底物——乳酸(或其鹽，如乳酸鋰)。

輔酶I：即 NAD?，是LDH反應(yīng)必需的輔酶。

顯色劑/終止液：通常是2,4-二x基苯肼，用于與丙酮酸反應(yīng)生成有色物質(zhì)。

標(biāo)準(zhǔn)品：已知濃度的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，保證結(jié)果準(zhǔn)確。

說明書：詳細(xì)的操作步驟、注意事項(xiàng)和計(jì)算方法。

四、結(jié)果解讀：數(shù)據(jù)意味著什么?

1. 臨床意義(血清樣本)

LDH廣泛存在于人體各組織中，因此其升高不具有器官特異性，必須結(jié)合其他檢查來判斷具體病灶。

LDH升高常見于可能原因

心臟疾病急性心肌梗死(發(fā)病后12-24小時(shí)開始升高，2-3天達(dá)峰，持續(xù)7-10天)，心肌炎。

肝臟疾病急性肝炎、肝硬化、肝癌、阻塞性黃疸。

血液疾病溶血性貧血、白血病、淋巴瘤。

肌肉疾病肌營(yíng)養(yǎng)不良、擠壓綜合征。

惡性腫瘤多種實(shí)體瘤(因其快速生長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞壞死)。

其他肺部梗死、腎病、休克。

2. 科研意義(細(xì)胞樣本)

細(xì)胞毒性檢測(cè)：在細(xì)胞培養(yǎng)板中，藥物或毒素處理會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，LDH釋放到上清液中。上清液中的LDH活性越高，代表細(xì)胞毒性越強(qiáng)/死亡細(xì)胞越多。

計(jì)算公式：細(xì)胞毒性 (%) = (實(shí)驗(yàn)組LDH - 空白組LDH) / (最大酶活組LDH - 空白組LDH) × 100%

細(xì)胞增殖/存活檢測(cè)：有些方法會(huì)檢測(cè)細(xì)胞裂解后的LDH活性，因其與活細(xì)胞數(shù)量成正比。

五、注意事項(xiàng)

樣本類型：血清、血漿(肝素抗凝)、細(xì)胞上清液、組織分漿等。避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞內(nèi)LDH含量高，輕微溶血都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果假性升高。

線性范圍：確保樣本的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，否則需稀釋后重測(cè)。

操作穩(wěn)定性：LDH對(duì)溫度敏感，反應(yīng)需在恒溫下進(jìn)行。操作應(yīng)迅速，避免反復(fù)凍融樣本。

不同同工酶：LDH有5種同工酶，分布在不同的器官。若需精確定位，可進(jìn)行LDH同工酶電泳分析。

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒是一個(gè)成熟、高效的工具。通過一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的顏色反應(yīng)，它將不可見的酶活性轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的光信號(hào)，從而為醫(yī)生和科研人員提供了評(píng)估細(xì)胞損傷程度和代謝狀態(tài)的關(guān)鍵窗口。理解其原理和步驟，是正確使用和合理解讀其結(jié)果的基礎(chǔ)。