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亞科因(武漢)生物技術(shù)有...

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VEGF R1/Flt-1 選購(gòu)指南:把血管生成研究經(jīng)費(fèi)用在刀刃上

閱讀:70      發(fā)布時(shí)間:2025-10-11
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1. 先分清科研級(jí)與GMP級(jí)

  • 科研級(jí):95 %純度足夠做Western、IP,單價(jià)≈1500元/100 μg,不帶TSE/BSE證書(shū),論文無(wú)壓力。

  • GMP級(jí):同一產(chǎn)線受FDA審計(jì),文件包≥12份,可用于細(xì)胞治療載體開(kāi)發(fā),溢價(jià)3倍,預(yù)算先確認(rèn)。

2. 選重組蛋白還是抗體對(duì)

  • 重組胞外區(qū)(aa 1-758):做配體-受體阻斷、SPR,選HEK293表達(dá),糖基化完整,KD誤差<10 %。

  • 捕獲抗體:克隆29508,識(shí)別Ig-like D2區(qū),不與sFlt-1短型交叉,ELISA背景直降50 %。

  • 檢測(cè)抗體:克隆49512,結(jié)合D3-D4,配對(duì)信號(hào)放大約1.8倍,梯度線性從7.8-500 pg/mL。

3. 標(biāo)簽策略決定下游應(yīng)用

  • His-tag:鎳柱一步純化,成本低;做晶體需切除,酶成本≈200元/次,預(yù)算要預(yù)留。

  • Fc-tag:二聚體更接近天然構(gòu)象,適合細(xì)胞實(shí)驗(yàn);但做SPR需額外買(mǎi)Anti-human Fc芯片,運(yùn)行成本+30 %。

  • Strep-tag II:純度高,背景金屬離子零殘留,適用于后續(xù)小鼠體內(nèi)注射,減少炎癥假陽(yáng)性。

4. 糖基化模式匹配受體活性

  • HEK293:復(fù)雜型N-糖,配體結(jié)合域正確折疊,VEGF-A165結(jié)合常數(shù)KD 16 pM,文獻(xiàn)引用最多。

  • Sf9昆蟲(chóng):高甘露糖型,KD略升至45 pM,夠用且價(jià)格便宜25 %,適合結(jié)構(gòu)生物學(xué)。

  • E.coli:無(wú)糖基,KD>1 nM,僅推薦做抗原或免疫,不做功能研究。

5. 批次間差異硬指標(biāo)

  • 活性CV:聲明EC50批間≤8 %,要求隨貨COA附SPR傳感圖,缺一份直接換供應(yīng)商。

  • 內(nèi)毒素:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)必須≤0.1 EU/μg,科研級(jí)常見(jiàn)1 EU/μg,價(jià)格差一倍,別為省錢(qián)把老鼠打休克。

6. 包裝與分裝陷阱

  • 大包裝1 mg:?jiǎn)蝺r(jià)降40 %,但復(fù)溶后-80 ℃保存僅穩(wěn)定6個(gè)月,小實(shí)驗(yàn)室優(yōu)先選5×200 μg。

  • 預(yù)分裝微管:每管50 μL×10,惰性氣體填充,減少氧化聚合,信號(hào)背景比提升20 %。

7. 檢測(cè)平臺(tái)兼容性

  • MSD:電化學(xué)發(fā)光需高親和力抗體,29508/49512配對(duì)S/N>100,線性范圍1-1000 pg/mL。

  • Luminex:微球偶聯(lián)抗體重量需≤25 μg/1×10?球,過(guò)量導(dǎo)致球聚集,CV飆至15 %。

  • AlphaLISA:受體-Fc做供體珠配體,需加25 mM MgCl?防止聚集,信號(hào)半衰期60 min內(nèi)讀完。

8. 參考標(biāo)準(zhǔn)品溯源

  • NIBSC 02/156:Flt-1/Fc標(biāo)準(zhǔn),1000 units/ampoule,標(biāo)定自家ELISA曲線,申報(bào)IND需要。

  • 內(nèi)部校準(zhǔn):與NIBSC比對(duì)偏差≤±10 %,保留雙對(duì)數(shù)回歸圖,審計(jì)時(shí)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)出。

9. 售后與技術(shù)支持

  • 活性爭(zhēng)議:7天內(nèi)免費(fèi)重測(cè),提供原始SPR傳感圖;若偏差>15 %整批退款。

  • 技術(shù)電話:24h內(nèi)回復(fù),VEGF-A競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)高背景,工程師在線幫你把封閉液換成Casein 1 %。

10. 價(jià)格橫向?qū)Ρ人俨?/h4>
品牌表達(dá)系統(tǒng)標(biāo)簽100 μg報(bào)價(jià)活性EC50推薦指數(shù)
AHEK293Fc2600元25 pg/mL★★★★★
BSf9His1800元60 pg/mL★★★★☆
CE.coliNone900元800 pg/mL★★☆☆☆


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