流式細(xì)胞實驗室、核心試劑廠商、IVD 注冊部在討論 IgG4 檢測系統(tǒng)時，最終都會落到同一頁 Excel：技術(shù)參數(shù)。數(shù)值寫錯一位，臨床性能報告直接退回重審。下面把 IGHG4 相關(guān)試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品與配套設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)拆成四大板塊，逐條給出測試方法、接受標(biāo)準(zhǔn)與常見踩坑點，方便直接寫進采購 URS 或注冊資料。
| 參數(shù) | 目標(biāo)值 | 測試方法 | 文件出處 |
|---|---|---|---|
| 定量下限 LoQ | ≤0.04 g/L | 3×空白標(biāo)準(zhǔn)偏差驗證 | CLSI EP17-A2 |
| 檢測下限 LoD | ≤0.01 g/L | 60 次零濃度測試的 95 % 百分位 | CLSI EP17-A2 |
| 線性上限 | ≥4.0 g/L | 5 份高值樣本等比稀釋，R≥0.990 | CLSI EP06-Ed2 |
常見失敗原因：試劑緩沖液里 Tween-20 超過 0.05 % 會拉高本底，LoD 瞬間飆到 0.02 g/L 下不去。
| 參數(shù) | 目標(biāo)值 | 測試方案 |
|---|---|---|
| 重復(fù)性 CV | ≤3 % | 同一批試劑測 20 次 0.3 g/L 樣本 |
| 中間精密度 CV | ≤5 % | 3 天、3 批試劑、2 名操作員 |
| 相對偏差 | ≤±6 % | 對標(biāo) ERM-DA470k 參考血清 |
注意：若采用鼠單抗體系，HAMA 陽性樣本會把偏差拉到 +12 %，需要在說明書中聲明“當(dāng) HAMA>150 ng/mL 時結(jié)果可能高估"。
IgG1 交叉：≤0.3 %
IgG2 交叉：≤0.2 %
IgG3 交叉：≤0.1 %
IgA、IgM、IgE 交叉：均 ≤0.05 %
驗證方法：把每種干擾蛋白配到 10 g/L，用待測體系回算 IgG4 濃度，結(jié)果必須低于 LoQ。多數(shù)國產(chǎn)試劑在 IgG1 項翻車，原因是捕獲抗體采用鼠抗人 IgG-Fc 通用克隆，不能識別鉸鏈區(qū) G4m(a) 異型。
定值不確定度 ≤±3 %（k=2）
瓶間差 CV ≤1 %（隨機 10 瓶）
含防腐劑 ≤0.1 % ProClin300，避免熒光標(biāo)記淬滅
賦值溯源鏈：一級標(biāo)準(zhǔn) NIBSC 67/086 → 工作校準(zhǔn)品 → 試劑盒校準(zhǔn)品，至少三級
高、中、低 3 水平：0.08 / 0.8 / 3.2 g/L
開瓶穩(wěn)定性 7 天 2–8 °C，偏差 ≤±5 %
凍干品復(fù)溶后 CV ≤2 %
| 模塊 | 關(guān)鍵指標(biāo) | 推薦值 | 影響點 |
|---|---|---|---|
| 光源 | 鹵素?zé)魤勖?/td> | ≥1000 h | 能量下降到 80 % 時 LoQ 上移 15 % |
| 溫控 | 反應(yīng)杯槽 | 37 ± 0.3 °C | 溫度漂移 1 °C 帶來 4 % 信號偏移 |
| 波長 | 比濁法主波長 | 340 nm | 帶寬 ≤8 nm，否則非特異散射增加 |
| 加樣針 | 死體積 | ≤30 μL | 決定高值樣本稀釋次數(shù)與試劑浪費 |
| 磁分離 | 剩磁 | ≤0.5 mT | CLIA 平臺磁珠殘留會抬升本底 |
定標(biāo)曲線擬合：四參數(shù) Logistic，R2≥0.995
報警閾值：相對殘差 >±10 % 自動拒標(biāo)
數(shù)據(jù)導(dǎo)出：支持 ASTM 與 HL7，字段需含“IgG4 亞類" Loinc 代碼 33702-3
審計追蹤：21 CFR Part 11 合規(guī)，修改記錄留痕 ≥5 年
試劑 2–8 °C 開封穩(wěn)定性：28 天偏差 ≤±5 %
37 °C 加速 7 天：信號下降 ≤8 %（等同于 12 個月實時）
運輸?shù)洌? m 自由跌落 3 次，瓶口無裂紋，蛋白濃度變化 ≤2 %
凍融耐受：?20 °C ? 室溫 3 循環(huán)，無肉眼沉淀，CV ≤3 %
防腐劑 ProClin300 濃度 ≤0.1 %，MSDS 第 3 節(jié)須標(biāo)注“對水生生物毒性類別 2"
廢液 pH 6.5–8.0，可直接入醫(yī)院污水處理系統(tǒng)；含 NaN? 的廢液需單獨桶裝
校準(zhǔn)品含人源組分，HBV、HCV、HIV 核酸檢測陰性報告隨貨同行
注冊單元：IgG4 測定試劑盒（免疫比濁法）需提交 3 家臨床試驗 1200 例數(shù)據(jù)
參考區(qū)間：20–40 歲健康人群 0.03–1.95 g/L（CLSI C28-A3）
說明書頁腳必須打印 G4m 異型抗體克隆號，例如“克隆 HP6025，識別 G4m(a) 抗原表位"
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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