實驗室里同一管抗體被貼上 NOS2、iNOS、NOS2A 三個貨號,報價相差 30 %,下游實驗卻全軍覆沒。把命名寫錯一次,整批肝細(xì)胞模型就得重養(yǎng)。下面七把鑰匙幫你直接開鎖,不再被字符串絆腳。
HGNC 數(shù)據(jù)庫給到的符號只有 NOS2,基因 ID 4843。NCBI Gene、Ensembl 同步沿用,這是文獻(xiàn)投稿時編輯只認(rèn)的字符串。把 NOS2A 寫進(jìn)正文,審稿人會立刻退回,因為人類基因組里沒有 NOS2A 這個座位。NOS2A 只在斑馬魚、爪蟾等物種出現(xiàn),用來區(qū)分三種 NOS 亞型。人類文章里出現(xiàn) NOS2A,99 % 是復(fù)制粘貼小鼠注釋時沒改過來。
誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的縮寫 iNOS 被抗體、試劑盒廠商寫進(jìn)產(chǎn)品名,比如 “anti-iNOS (NOS2) antibody"。蛋白印跡圖注里寫 iNOS 沒問題,同行一看就懂。換到基因表達(dá)柱形圖,Y 軸必須標(biāo) NOS2 mRNA,否則會被質(zhì)疑連基因和蛋白都沒分清。
個別供應(yīng)商把“hepatocyte NOS"縮寫成 HEP-NOS,聽起來像第四種亞型,實質(zhì)仍是 NOS2 在肝細(xì)胞里的定位研究。下單前先讀包裝小字,序列對應(yīng)的還是 NP_000625.3,別讓前綴嚇出溢價。
2015 年 PNAS 報道 NOS2 在 Cys109、Cys345 兩個位點催化 S-亞硝基化,把一氧化氮轉(zhuǎn)移到靶蛋白。于是出現(xiàn)“Peptidyl-cysteine S-nitrosylase NOS2"這一長串關(guān)鍵詞。搜索文獻(xiàn)時用這條長尾詞能直接定位亞硝基化實驗,而不會被 5 萬條炎癥文章淹沒。
NCBI 在 2021 年把參考蛋白版本升到 .3,新增 7 個氨基酸的替代剪接注釋。舊版抗體可能把表位落在新增區(qū)域外,導(dǎo)致 KO 細(xì)胞仍出現(xiàn) 35 kDa 雜帶。下單前在 COA 文件里核對免疫原坐標(biāo),不在 331-350 區(qū)間內(nèi)的統(tǒng)統(tǒng)跳過。
兩家主流抗體商 SC-7271 與 BD-610328 分別用這兩株雜交瘤。4D2 識別中間鉸鏈區(qū),做免疫熒光背景干凈;6D11 識別人類特異 C 端,做流式更穩(wěn)。論文里出現(xiàn)抗體貨號,編輯會要求提供 STR 鑒定報告,提前把 PDF 準(zhǔn)備好可省兩周往返。
1400W 被不少供應(yīng)商標(biāo)成“iNOS inhibitor",其實它對三種 NOS 都有抑制,只是對 NOS2 的 Ki 較低。方法部分寫“selective NOS2 inhibitor 1400W"更嚴(yán)謹(jǐn),避免審稿人質(zhì)疑選擇性數(shù)據(jù)。
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