Goat Rabbit IgG 二抗：維修與保養(yǎng)的實(shí)戰(zhàn)檔案

1. 開管即分裝

原裝 1 mL 液體抗體反復(fù)升溫一次，活性損失 5 %。收到后立刻在生物安全柜內(nèi)分裝成 20 µL 微管，管壁用耐低溫記號筆寫貨號-批次-日期，避免手寫標(biāo)簽被乙醇抹掉。每管只夠一次大膜，杜絕回凍。

2. 甘油濃度臨界點(diǎn)

加 50 % 甘油后 –20 °C 不結(jié)冰，但甘油 <30 % 仍出現(xiàn)冰晶，抗體 Fc 段被剪切。用移液器先加 100 µL 抗體，再補(bǔ) 100 µL 100 % 甘油，顛倒 20 次，瞬時(shí)離心，確保終濃度 50 %，冰晶窗口關(guān)閉。

3. 凍干備份法

實(shí)驗(yàn)室冰箱常年 –80 °C 空間緊張，可把剩余 200 µL 做凍干：加等量 10 % 蔗糖+0.05 % Tween-20，液氮預(yù)凍后上凍干機(jī) 24 h，得白色餅塊。真空封袋，常溫運(yùn)輸 7 天活性降 <2 %，到外地合作組再復(fù)溶，條帶強(qiáng)度與新鮮對照差 3 % 以內(nèi)。

4. 化凍節(jié)奏

37 °C 水浴 30 s 足以化凍 20 µL 微管，超過 60 s 管中心溫度升到 25 °C，聚合反應(yīng)開始?；炅⒖滩灞希傧♂尦晒ぷ饕?，能把聚集體控制在 1 % 以下，背景黑點(diǎn)消失。

5. 工作液壽命

稀釋成 1:5 000 的 TBST 工作液，4 °C 存放 72 h 信號剩 85 %。加 0.02 % NaN? 可延長到 7 天，但 HRP 標(biāo)記會(huì)被抑制。折中方案：第一天用剩的工作液直接做 CoIP 檢測，不浪費(fèi)也不影響后續(xù)顯色。

6. 管口清潔

每次取液后用 70 % 乙醇擦管口外螺紋，防止鹽析結(jié)晶劃破密封圈。一年后打開無白色顆粒，蒸發(fā)量 <1 %，濃度維持原廠標(biāo)稱值。忽略這步，密封圈縫隙吸潮，抗體濃度逐年升高，導(dǎo)致背景加深卻找不到原因。

7. 冰箱溫度分布驗(yàn)證

–20 °C 家用冰箱門架溫度波動(dòng) 8 °C，底層抽屜只波動(dòng) 2 °C。把抗體盒放在最下層，加一瓶 500 mL 甘油做蓄冷塊，日常開門 30 s 內(nèi)溫度漂移 <1 °C，相當(dāng)于給抗體穿件恒溫背心。

8. 污染急救

微管掉進(jìn)氣溶膠污染，菌落 PCR 檢測出現(xiàn) 16S 條帶。用 0.22 µm 濾膜直接過濾，損失體積 10 µL，活性降 3 %，比加 NaN? 更安全。過濾后換新管，原管高壓滅掉，避免交叉污染整個(gè)盒子。

9. 過期不等于報(bào)廢

COA 寫 36 個(gè)月，到期后先測 A280，蛋白濃度下降 <5 % 可繼續(xù)用于定性 Western。條帶弱 10 %，把稀釋比例從 1:5 000 調(diào)到 1:3 000，信號回到原位，還能再撐半年。濃度掉 15 % 以上直接降級做斑點(diǎn)封閉實(shí)驗(yàn)，不浪費(fèi)科研經(jīng)費(fèi)。

10. 電子記錄同步

每取一次管，在 ELN 里掃碼記錄剩余數(shù)量，系統(tǒng)自動(dòng)算半衰期。低于 3 管觸發(fā)采購提醒，提前 30 天訂貨，價(jià)格鎖定，避免臨時(shí)下單遇到批次斷檔。三年下來，實(shí)驗(yàn)室因?yàn)閿嘭浿貜?fù)驗(yàn)證的費(fèi)用降到零。