Goat Rabbit IgG 二抗選型：把 A23920 用到位

實驗室里真正拖慢進度的從來不是儀器，而是“抗體配不上體系"。山羊抗兔 IgG 這條線 SKU 上千，參數(shù)表長得相似，真到 WB、IHC、FC 多重染色時才發(fā)現(xiàn)信號弱、背景高、批次跳變。下文只聊“怎么選"，把 A23920 當作參照，拆開看指標，套進真實場景，直接給答案。

1. 先鎖定“抗什么"——IgG 亞類與輕鏈

兔 IgG 只有一條主亞類 IgG，但輕鏈有 κ、λ 之分。山羊抗兔 IgG 通常用全分子免疫，能同時抓 κ、λ；倘若實驗里兔單克隆帶 λ 輕鏈，而二抗只標“anti-Fc"，輕鏈位點親和力下降 30%，信號直接腰斬。

A23920 的免疫原是完整兔 IgG，抗原表位覆蓋 Fc 與 Fab，輕鏈覆蓋率 96%，WB 1:10000 仍能壓到 0.1 ng 條帶，屬于“全分子"型，通用性最高。

2. 再鎖定“怎么標記"——HRP、熒光、生物素路線

• WB/ELISA 優(yōu)先 HRP：A23920 自帶 HRP，比活性 150 U/mg，4 ℃ 存放 12 個月活力衰減 <5%。

• 多色熒光選 Alexa Fluor 488/594/647：同一山羊宿主，預吸附鼠、人 IgG，交叉 <0.5%，可放同一 panel。

• IHC 放大體系選生物素：鏈霉親和素級聯(lián)能把信號再抬 8–10 倍，適合福爾馬林固定組織。

標記方式一旦定錯，后面換抗體要重跑整條標準曲線，時間成本最高。

3. 交叉反應(yīng)預吸附——“0.5%"是分水嶺

山羊血清天然含抗鼠、抗人 IgG。未經(jīng)吸附的“山羊抗兔"在鼠組織切片里能蹭出棕色背景，IHC 評分直接掉級。

A23920 通過固定化鼠、人、牛 IgG 連續(xù)過柱，ELISA 檢測交叉 <0.5%，達到“multi-adsorbed"級別。選購時看 COA 里“cross-reactivity"欄，數(shù)值高于 1% 的批次直接放棄，不要賭“也許我組織里沒鼠"。

4. 工作濃度不是“推薦 1:1000"那么簡單

抗體濃度 mg/mL、比活性、目標豐度三條線共同決定稀釋度。

• WB：靶蛋白 10 ng–1 μg，A23920 1:5000–1:15000；轉(zhuǎn)膜用 0.22 μm PVDF，封閉 5% 脫脂奶粉，可壓背景到膠片 0.05 AU。

• IHC：FFPE 組織，抗原修復 95 ℃ 檸檬酸鈉 pH6.0，A23920 1:200–1:400，DAB 顯色 45 s，鏡下棕度 80% 細胞質(zhì)陽性。

• FC：細胞數(shù) 1×10^6，A23920 1:100，4 ℃ 30 min，熒光強度 MFI 比空白高 100 倍即可。

濃度梯度跑 3 個數(shù)量級，選信噪比最高的點，不要迷信說明書。

5. 批次差控制——把“-lot"號寫進記錄表

HRP 偶聯(lián)是酶學反應(yīng)，批間差異天然存在。同一項目連續(xù)跑 6 個月，換批號必須重標曲線。

A23920 每批次出廠留 0.5 mL 參考品，公司輸入 lot 號可下載該批的 WB 圖、IHC 圖。實驗記錄里把“抗體批號"與“顯色灰度值"并列，日后投稿審稿人要求原始數(shù)據(jù)，能直接導出。

6. 存儲與反復取用——凍融是隱形殺手

HRP 對凍融敏感，第 3 次循環(huán)活力掉 15%。

• 收到抗體先分裝 20 μL/管，-20 ℃ 保存，避免“整瓶天天拿"。

• 稀釋后工作液當天棄，HRP 在含 0.05% Tween-20 的 PBS 里 4 ℃ 放 24 h 活力衰減 8%，隔夜跑膜可能背景升高。

• 若實驗間隔 >1 個月，用真空凍干機把剩余抗體凍成干粉，復溶后活性回收 95% 以上。

7. 價格與貨期——把“單價"拆到“每 10 cm2"

A23920 100 μL 標價 680 元，按 WB 1:10000 可配 1 L 工作液，跑 200 張迷你膠，單張成本 3.4 元；換成預裝 1 mg 凍干粉規(guī)格 2180 元，復溶后相當于 10 mL 原液，可稀釋 20 L，單張成本降到 0.1 元。大批量篩查直接買凍干粉，小課題組用液體規(guī)格減少分裝誤差。

8. 實戰(zhàn)對照表——5 個場景一次給清