泛素化蛋白檢測(cè)

泛素化蛋白檢測(cè)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

泛素化蛋白檢測(cè)是為了鑒定和量化dànbáizhì在經(jīng)過(guò)泛素化翻譯后修飾后的狀態(tài)。以下是檢測(cè)泛素化蛋白的常用方法：

圖1.泛素化修飾研究路線(xiàn)

1、免疫印跡分析 (Western Blot)：

免疫印跡是檢測(cè)泛素化蛋白的常用方法。這個(gè)過(guò)程通常包括：

• 提取dànbáizhì樣本。

• 使用SDS-PAGE電泳分離dànbáizhì。

• 將dànbáizhì轉(zhuǎn)移到膜上。

• 使用針對(duì)泛素的抗體進(jìn)行檢測(cè)，以識(shí)別泛素化的dànbáizhì。

2、免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP)：

• 目的: 富集特定的泛素化目標(biāo)蛋白。

• 方法: 使用目標(biāo)蛋白的特異性抗體進(jìn)行免疫沉淀，然后進(jìn)行Western blot，使用抗泛素抗體來(lái)檢測(cè)泛素化。

3、雙免疫沉淀 (Tandem Immunoprecipitation)：

• 目的: 鑒定與目標(biāo)蛋白相關(guān)的特定泛素鏈類(lèi)型。

• 方法: 首先使用抗泛素鏈特異性抗體（例如抗-K48或抗-K63鏈的抗體）進(jìn)行沉淀，然后使用目標(biāo)蛋白的抗體進(jìn)行第二次沉淀。

4、質(zhì)譜分析 (Mass Spectrometry)：

• 目的: 鑒定泛素化位點(diǎn)以及泛素鏈的類(lèi)型。

• 方法: 利用LC-MS/MS技術(shù)鑒定泛素化的dànbáizhì和修飾位點(diǎn)。經(jīng)常結(jié)合酶消化（如Trypsin消化）來(lái)產(chǎn)生肽段，然后進(jìn)行分析。

5、熒光顯微鏡技術(shù)

• 使用標(biāo)記泛素的熒光標(biāo)簽，觀察泛素化蛋白在細(xì)胞中的位置和分布。這種方法可以用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)泛素化事件。

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