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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染的情況2019/12/27
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)如下:常見(jiàn)的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡
常見(jiàn)菌類(lèi)污染情況圖片2019/12/18
常見(jiàn)菌類(lèi)污染情況圖片1.桿菌常見(jiàn)的有大腸桿菌，長(zhǎng)度通常在2-5um左右。2.球菌常見(jiàn)的有葡萄球菌，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見(jiàn)的有毛霉，菌絲寬2-10um左右，長(zhǎng)度短則幾十um，長(zhǎng)則可達(dá)幾mm。以上3種是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的菌類(lèi)污染，其共性是增殖快，適應(yīng)能力強(qiáng)，很難*，一般如果確認(rèn)培養(yǎng)細(xì)胞有以上污染，建議盡快丟棄，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染，確認(rèn)沒(méi)有后再重新復(fù)蘇。那么細(xì)胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長(zhǎng)，
細(xì)胞污染防治的一些建議2019/12/11
無(wú)論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對(duì)的，那對(duì)于細(xì)胞污染，我覺(jué)得zui好的措施就是預(yù)防為主，因?yàn)榧?xì)胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會(huì)差很多。所以我先來(lái)說(shuō)下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場(chǎng)所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場(chǎng)所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢？首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實(shí)驗(yàn)耗材盡量放置在合適
關(guān)于如何鑒定收到的新細(xì)胞是否有污染2019/12/05
一、肉眼觀察以下幾項(xiàng)：1.細(xì)胞瓶身：如果瓶身上沒(méi)有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細(xì)胞過(guò)密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進(jìn)行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類(lèi)污染，菌類(lèi)污染通常分為桿菌、球菌和霉菌，為了方便大家分
神經(jīng)元老化，對(duì)取出蛋白質(zhì)垃圾的影響2019/11/18
根據(jù)賓夕法尼亞大學(xué)佩雷??爾曼醫(yī)學(xué)院的一項(xiàng)新研究，隨著細(xì)胞老化，它們排出有害垃圾的能力下降。研究結(jié)果表明，老年神經(jīng)元中自噬的惡化-從未復(fù)制過(guò)的細(xì)胞和它們所居住的尸體一樣古老-可能是一系列神經(jīng)退行性疾病(如肌萎縮側(cè)索硬化癥，阿爾茨海默氏癥)的危險(xiǎn)因素，和帕金森氏癥。使用來(lái)自年輕和老年小鼠的神經(jīng)元的活細(xì)胞成像，生理學(xué)教授ErikaHolzbaur博士和作者，Holzbaur實(shí)驗(yàn)室的博士后研究員AndreaStavoe博士本周在eLife上發(fā)表了他們的研究。自噬的重要性在2016年被諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)
ELISA試劑盒初學(xué)者看結(jié)果2019/10/31
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡(jiǎn)單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問(wèn)題，是實(shí)驗(yàn)室比較常用的一種檢測(cè)方法。而這種簡(jiǎn)單的分析方法的核心，就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒(méi)有它，我們的實(shí)驗(yàn)就變成了一個(gè)二元的“是/不是”測(cè)試。有了它，我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么，是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強(qiáng)大呢?讓我們?cè)贓LISA的背景來(lái)討論這個(gè)問(wèn)題。簡(jiǎn)單地說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽(yáng)性對(duì)照。例如，如果對(duì)人類(lèi)IgG進(jìn)行ELISA檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類(lèi)IgG，它會(huì)讓你立刻得
輕松看懂pcr實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖2019/10/25
辛辛苦苦提完RNA，逆轉(zhuǎn)錄后一個(gè)個(gè)孔加完引物和模板，Z后進(jìn)行RT-PCR，你以為這樣就可以美滋滋地坐等結(jié)果了？等到一幅下面這樣的結(jié)果圖，不知道對(duì)于剛接觸RT-PCR的你來(lái)說(shuō)內(nèi)心是否是崩潰的？這是啥？怎么看？別急，讓我慢慢跟你介紹，看完后你就能準(zhǔn)確的分析出你的RT-PCR結(jié)果了?！高@里以7500軟件為例進(jìn)行介紹」1.首先設(shè)置好內(nèi)參和對(duì)照組「在AnalysisSettings處」，一般我們?cè)谏蠙C(jī)前會(huì)對(duì)應(yīng)設(shè)置好的，如果設(shè)置好的話可以直接跳至第3點(diǎn)。如果沒(méi)有設(shè)置好的話是需要重新進(jìn)行設(shè)置。2.點(diǎn)擊進(jìn)去后，
pcr實(shí)驗(yàn)原理及步奏2019/10/14
實(shí)驗(yàn)方法原理基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為
巴氏芽孢桿菌如何培養(yǎng)說(shuō)明2019/09/10
巴氏芽孢桿菌（Bacilluspasteurii）產(chǎn)脲酶，尿素酰胺水解酶,近來(lái)受到很多研究人員追捧,那如何培養(yǎng)這菌株成了很多大家關(guān)注的問(wèn)題,下面就一一詳細(xì)介紹巴氏芽孢桿菌如何培養(yǎng)說(shuō)明巴氏芽孢桿菌培養(yǎng)溫度:30℃培養(yǎng)時(shí)間:18-24小時(shí)培養(yǎng)基:.CASOAGAR+尿素（20克/升）酪蛋白胨15克大豆蛋白胨5克氯化鈉5克瓊脂20克蒸餾水1升PH7.3斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在2-8℃保存。凍干活化,干粉要全部用完,不能保留,用0.1-0.2ml的培養(yǎng)液或者無(wú)菌水溶解，接種在2支斜面上，因凍干菌種處于休眠
PCR體系中引物占有十分重要的地位2019/09/06
在整個(gè)PCR體系中，引物占有十分重要的地位。PCR的特異性要求引物與靶DNA特異結(jié)合，不與其他非目的的DNA結(jié)合，PCR的靈敏性要求DNA聚合酶能與引物進(jìn)行有效的延伸，可見(jiàn)引物設(shè)計(jì)好壞與PCR結(jié)果密切相關(guān)。一、PCR引物設(shè)計(jì)原則1、引物長(zhǎng)度一般在15-30bp引物長(zhǎng)度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不應(yīng)大于38bp，因?yàn)檫^(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)；2、引物GC含量一般為40%-60%引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，GC含
如何看懂流式結(jié)果圖2019/08/30
流式結(jié)果圖有4種類(lèi)型，分別為:1.直方圖2.散點(diǎn)圖3.等高線圖4.密度圖下面一一為大家介紹1.直方圖（Histograms）a.橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。b.縱坐標(biāo)一般是相對(duì)細(xì)胞數(shù)。直方圖適用于分析處理周期（如下圖）直方圖分析數(shù)據(jù)注意事項(xiàng)：①不能比較不同標(biāo)記之間的表達(dá)量。如一號(hào)樣本單標(biāo)記CD133、二號(hào)樣本單標(biāo)記CD44，那么CD133與CD44表達(dá)量不能用直方圖進(jìn)行比較。②直方圖的形狀（直方圖的高度及寬度）取決于儀器的類(lèi)型、處理軟件和樣本③檢測(cè)目的細(xì)胞非常少
實(shí)驗(yàn)新手系列：關(guān)于wb實(shí)驗(yàn)2019/08/16
一、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注意的問(wèn)題①蛋白樣品的提取及蛋白含量的檢測(cè)蛋白樣品的提取咱們*是按照試劑盒說(shuō)明書(shū)來(lái)做的，步驟沒(méi)有什么講的，但是因?yàn)榈鞍讟悠返暮脡闹苯記Q定了是否能做出來(lái)蛋白條帶，這就好比蓋房子所需要的磚頭一樣，一定要?jiǎng)?wù)必認(rèn)真。②儀器準(zhǔn)備清洗玻璃板：玻璃板的正確拿法應(yīng)該是拿住玻璃板的左右兩側(cè)不要用手拿上下兩端，避免手套上面的臟東西順著水流流到玻璃板上，玻璃板請(qǐng)一定務(wù)必清洗干凈，不干凈的玻璃板上面的殘留物可能會(huì)影響凝膠之間的化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致膠出現(xiàn)問(wèn)題，對(duì)后面的結(jié)果影響很大。玻璃板放置：玻璃板底部對(duì)齊，
如何作好軟瓊脂實(shí)驗(yàn)分析2019/08/01
軟瓊脂(softagar)實(shí)驗(yàn)一般用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的集落形成能力?，F(xiàn)在這種方法越來(lái)越多的用于分離癌細(xì)胞，也可以用來(lái)確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性，為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡(jiǎn)單，但如果細(xì)節(jié)掌握不好，往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)缺乏說(shuō)服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗(yàn)上栽了跟頭，請(qǐng)不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試：1.要確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（80℃），尤其是在做基底時(shí)，如果瓊脂凝固過(guò)快會(huì)導(dǎo)致基底不均一；2.做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應(yīng)該立即將氣泡趕走；3
細(xì)胞可以頻繁換液?jiǎn)?2019/07/30
剛復(fù)蘇的細(xì)胞狀態(tài)不好，有許多死細(xì)胞，頻繁換液好嗎？大致如題，有一些人認(rèn)為細(xì)胞剛復(fù)蘇不能狗頻繁的換液，說(shuō)是細(xì)胞會(huì)自己分泌細(xì)胞因子維持自己的生存，換液的話，就會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，長(zhǎng)的不好，但是我的細(xì)胞狀態(tài)不好而且有很多細(xì)胞碎片，細(xì)胞死亡之后在培養(yǎng)基中會(huì)不會(huì)釋放很多的有毒物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)不利，所以就想要換液把死細(xì)胞和細(xì)胞碎片都洗掉，目前不知道怎么選擇，所以想請(qǐng)大家給一下就參考意見(jiàn)？能洗掉的就洗，洗不掉的也不用刻意的用力吹，正如你所說(shuō)的細(xì)胞密度小，可能會(huì)損害細(xì)胞。換液的話還是2~3天換，不要每天都換液。
細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)版知識(shí)（供參考）2019/07/24
基礎(chǔ)篇-無(wú)菌操作基本技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。2.無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況2019/07/18
近看到不少問(wèn)有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)污染的事，正好我看到了一個(gè)有關(guān)這方面的總結(jié)，很全很好很強(qiáng)大，跟大家分享下細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)如下:常見(jiàn)的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
熒光免疫測(cè)定技術(shù)的概念2019/07/16
1、熒光免疫測(cè)定技術(shù)的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測(cè)定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)，稱(chēng)為免疫熒光素技術(shù)。2、熒光的產(chǎn)生：物質(zhì)吸收外界能量而進(jìn)入激發(fā)狀態(tài)，在回復(fù)基態(tài)時(shí)多余的能量以電磁輻射的形式釋放，即發(fā)光，這種光稱(chēng)為熒光。這種物質(zhì)，稱(chēng)為熒光素。由光激發(fā)所引起的熒光，為光致熒光------熒光免疫技術(shù)由化學(xué)反應(yīng)所引起的熒光，為化學(xué)熒光------化學(xué)發(fā)光技術(shù)3、熒光素的熒光特性：⑴停止供能，熒光現(xiàn)象隨即終止⑵對(duì)光的吸收和熒光的發(fā)射具高度選擇性,綠
流式實(shí)驗(yàn)中的抗體滴定2019/07/16
一般我們購(gòu)買(mǎi)商品化的primaryantibody的時(shí)候，抗體的說(shuō)明書(shū)中都會(huì)給我們一個(gè)推薦的抗體使用濃度。這個(gè)濃度在一定程度上來(lái)說(shuō)，是過(guò)飽和的，可以滿足大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的染色需求。但是因?yàn)槭沁^(guò)飽和的濃度，這就帶來(lái)了一定程度的抗體浪費(fèi)。而過(guò)量的抗體，也會(huì)大大提高樣本的自發(fā)熒光。從另一個(gè)角度來(lái)看，因?yàn)閺S家給出的推薦濃度都是基于一個(gè)特定的樣本濃度和樣本體積，所以在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中，比如樣本濃度或樣本體積過(guò)大的實(shí)驗(yàn)，推薦的濃度就無(wú)法達(dá)到飽和滴加的要求。在這樣的前提下，推薦實(shí)驗(yàn)用戶針對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)要求，zui好可
細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)2019/07/10
1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。2.無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)
如何選擇合適的培養(yǎng)基2019/07/05
MEM細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里常見(jiàn)和基本的實(shí)驗(yàn)了，但卻不是簡(jiǎn)單的。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問(wèn)。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒(méi)辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說(shuō)起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、ThermoFisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)?！鬗EM是由Eag
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