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上海遠慕生物科技有限公司
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大鼠原代細胞分離與培養(yǎng)實驗分析2021/09/15
一、大鼠神經(jīng)元細胞（酶消化法）簡述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中。二、大鼠雪旺細胞（植塊法）簡述：新生24h大鼠，取坐骨神經(jīng)，剝?nèi)ネ饽ず褪?，剪?mm3的小塊，均勻鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量血清，37℃CO2培養(yǎng)2h后，再加入培養(yǎng)基，24-48h后有細胞爬出。三、大鼠胰島（酶消化加密度梯度離心）簡述：SD大鼠，常規(guī)麻醉、固定、消毒、進腹、膽總管插管，逆行注入預(yù)冷的１mg/ml膠原酶P溶液10ml。迅速取下胰腺，38℃水浴消化10分鐘
蛋白Marker使用常見問題分析！2021/09/15
做蛋白表達實驗時，通常用SDS-PAGE電泳檢測目的蛋白的表達情況，MARK是其中非常重要的參照物，使用Mark會遇到以下幾種情況：條帶模糊：電壓過高或電泳時間過長，產(chǎn)熱過多導(dǎo)致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產(chǎn)品使用說明書。電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結(jié)果建議在使用前將緩沖液預(yù)冷。分離膠的濃度偏低，建議使用合適的膠濃度。SDS-PAGE凝膠放置時間過長，建議使用新配制的凝膠電泳。帶型不整齊：建議點樣時將蛋白marker放在泳道中間。如在凝膠兩側(cè)泳道，由于邊緣效
蛋白質(zhì)分析，純化你真的會做嗎？2021/09/15
對于分析蛋白質(zhì)個體和蛋白質(zhì)復(fù)合物，鑒定蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)、核酸之間的相互作用，蛋白質(zhì)的純化是這些研究的基石。由于純化天然蛋白是一件ji具挑戰(zhàn)性的工作，科學(xué)家開發(fā)出來利用標(biāo)簽融合蛋白來捕獲純化和檢測目的蛋白的實驗體系。純化蛋白*的就是親和層析，它是通過目的蛋白與相匹配的固定化配體的進行特異性結(jié)合，實現(xiàn)純化目的。最顯著的特點就是，良好表征的標(biāo)簽與其對應(yīng)的固相偶聯(lián)的配體的結(jié)合，能夠?qū)?biāo)記蛋白單步操作實現(xiàn)親和純化。融合標(biāo)簽的抗體也被廣泛用于下游檢測和實驗，從而無需針對每種特定重組蛋白去開發(fā)相應(yīng)的探針?？贵w純
牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中的用處！2021/09/15
牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用。主要成分：1.蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。2.多肽——血小板促生長因子能促細胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細胞增殖因子；成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經(jīng)細胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細胞生長也有一定作用。3.激素——胰島素：促進細胞攝取葡萄
葡聚糖凝膠柱（sephadex column）使用及注意事項2021/09/14
1SephadexG型葡聚糖凝膠只適合在水中使用，SephadexG-25羥丙化后就是SephadexLH-20。其既有分子篩作用，在由極性與非極性溶劑組成的溶劑中還有反相層析效果。雖然價位很高，但由于性能頗佳，可再生利用，所以倍受親睞。此外上柱樣品損失很少，對處理小樣品較好，這也是我們實驗室常用的原因之一。2SephadexLH20的原理。SephadexLH20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫
常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗2021/09/14
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、垂直平板電泳的制膠用于垂直平板電泳的凝膠通常被灌注在兩側(cè)有隔片的兩塊玻璃板之間。模具垂直放置，周圍用硅油（或其他密封物質(zhì)）密封，或用夾子夾緊，以免膠液泄漏。溶液從頂部灌注。灌膠完成后從頂部插入梳子，以形成加樣孔。梳子寬度取決于玻璃板的寬度，梳子的厚度和凝膠的厚度取決于隔片的厚度。在垂直電泳裝置上可以進行連續(xù)電泳或不連續(xù)電泳。它們的差別之一在于制膠方法的不同。連續(xù)電泳僅有分
免疫定量分析中標(biāo)準(zhǔn)品的制備2021/09/14
標(biāo)準(zhǔn)品是標(biāo)記免疫分析定量的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中，或各實驗室之間使用的標(biāo)準(zhǔn)品不一致，則可影響到實驗結(jié)果的可比性。為此，對標(biāo)記免疫分析所使用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)滿足如下要求。一、標(biāo)準(zhǔn)品的要求1、化學(xué)結(jié)構(gòu)：原則上標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與被測物具有*相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括相同的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。但在實際工作中，用化學(xué)結(jié)構(gòu)*相同的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品。此時，應(yīng)充分了解這
抗原和抗體的區(qū)別？千萬別搞混了！2021/09/14
免疫系統(tǒng)對于人體來說至關(guān)重要，是機體執(zhí)行免疫功能及免疫應(yīng)答的重要系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)具有的功能有協(xié)調(diào)機體其他系統(tǒng)共同維持機體生理平衡和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、識別并排除抗原性異物，有效防衛(wèi)病原體入侵?？乖涂贵w是免疫系統(tǒng)中的重要組成，那么，抗原和抗體的區(qū)別是什么呢？一、什么是抗原？什么是抗體？1、抗原。抗原是能夠引起人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并能與抗體和淋巴細胞在體內(nèi)外結(jié)合的物質(zhì)。抗原可分為*抗原和半抗原，*抗原具有免疫原性和反應(yīng)原性兩種能力，*抗原有bing原體、異種動物血清等等。半抗原只具有反應(yīng)原性而沒有免疫
超實用流式細胞術(shù)常見問題解答！2021/09/10
1、用于做Western或ELISA的一抗可否用于流式細胞術(shù)？看你說明書上是怎么說的了，如果沒有說就不可以做流式，需要另外買了。2、請問流式細胞術(shù)單抗直接熒光需要幾種對照？首先確認(rèn)你用的直標(biāo)抗體的熒光染料是什么，再確定該抗體的來源種屬，選擇相應(yīng)的同型對照。如：你現(xiàn)在想檢測小鼠淋巴細胞表面的CD4抗原，熒光染料為FITC，抗體來源為大鼠的IgG1亞型，即RatantiMouseCD4-FITC（IgG1），你所需要的同型對照就應(yīng)該是RatIgG1-FITC，一般的抗體說明上都會寫清。3、6孔板的細
合成多肽與重組蛋白作為抗原的區(qū)別2021/09/10
目前抗體制備常采用多肽抗原及重組蛋白質(zhì)抗原，這兩種方法各有優(yōu)缺點，需結(jié)合實驗需求進行選擇。重組蛋白質(zhì)抗原上往往帶有多個不同的抗原決定簇，其中有些是順序決定簇，有些為結(jié)構(gòu)決定簇。利用變性的抗原免疫動物獲得多克隆抗體是針對各個抗原決定簇的抗體的混合物，在一般應(yīng)用中能夠用于檢測天然結(jié)構(gòu)或變性的目標(biāo)蛋白。利用變性蛋白做為免疫原的一個附帶的好處是變性蛋白往往有更強的免疫原性，能夠刺激動物產(chǎn)生強的免疫應(yīng)答。用做抗原目的的蛋白質(zhì)一般選擇使用大腸桿菌表達體系，因為該體系時間與金錢成本最di。為了提高目標(biāo)蛋白質(zhì)表
如何選擇凝膠填料？科研人不能錯過！2021/09/10
做分離純化工作的人都知道，選擇合適的填料是至關(guān)重要的。通過優(yōu)化組合找到高效的純化工藝，使用最少的步驟達到蛋白質(zhì)產(chǎn)量和純度的最da化。下面看看一下填料選擇介紹。1、測定-分子量、PI當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y定。分離范圍廣闊的SuperoseHR預(yù)裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個含不同PH緩沖液的試管中，可簡易地測出PI，并選擇純化用緩沖液的最佳PH。2、選擇-層析方法若對目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種
細胞培養(yǎng)的具體步驟，老生常談了！2021/09/10
具體步驟：1、細胞復(fù)蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中，加入37oC預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2、細胞傳代當(dāng)細胞密度達到80%~90%（過早產(chǎn)量不足，過晚細胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細胞一代，
你還不能區(qū)分蛋白互作的幾種方法嗎？2021/09/09
理論知識點看了千千萬，但是還是容易混淆概念傻傻分不清IP，Co-IP，GST-PullDown，本文我們不止放送有IP與Co-IP區(qū)別知識要點，而且也將研究蛋白互作幾種方法（酵母雙雜交系統(tǒng)（Y2H），CO-IP的關(guān)系，GST-PullDown）之間的區(qū)別以及優(yōu)缺點簡明扼要的收納進來，看了這篇文章你還不能區(qū)分IP，Co-IP，GST-PullDown你就來打我。話不多說，看下文：獨角戲——IP:免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）就是用偶聯(lián)相應(yīng)抗體的磁珠把你要研究的蛋白X免疫沉
慢病毒載體，就這么實用！2021/09/09
慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。一、應(yīng)用慢病毒載體的研究發(fā)
緩沖溶液作用原理和pH值介紹！2021/09/09
正常人血漿的pH值為7.35～7.45。血漿PH值的相對恒定性有賴于血液內(nèi)的緩沖物質(zhì)以及正常的肺、腎功能。血漿的緩沖物質(zhì)包括NaHCO3/H2CO3、蛋白質(zhì)鈉鹽/蛋白質(zhì)和Na2HPO4/NaH2PO4三個主要的緩沖對，其中以NaHCO3/H2CO3最為重要。紅細胞內(nèi)還有血紅蛋白鉀鹽/血紅蛋白、氧合血紅蛋白鉀鹽/氧合血紅蛋白、K2HPO4/KH2PO4、KHCO3/H2CO3等緩沖對參與維持血漿PH值的恒定。當(dāng)酸性或堿性物質(zhì)進入血液時，血漿中的緩沖物質(zhì)可有效的減輕酸或堿性物質(zhì)對血漿PH值的影響，特
PBS緩沖液和Hanks緩沖液的區(qū)別你知道嗎？2021/09/09
實驗時經(jīng)常用到PBS緩沖液，但是很多文獻里面也用到了Hanks緩沖液，不知道這兩種緩沖液在細胞培養(yǎng)方面有什么區(qū)別嗎?也就是說它分別適合于哪些情況?PBS：磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。PBS溶液又稱磷酸鹽緩沖溶液，一般選擇K2HPO4和KH2PO4配制，因為鈉鹽溶解的較慢。根據(jù)不同pH的溶液，稱量不同質(zhì)量的磷酸鹽，也可以用pH計調(diào)溶液的pH。PBS一般用作支持電解質(zhì)。其配置方法如下：采用去離子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步驟進行：(1)配制1
配制培養(yǎng)基的各項要求2021/09/08
我們知道培養(yǎng)基的分類多種多樣，其中就有天然與人工配制之分，天然培養(yǎng)基有血漿、血漿、秸稈、土豆等，而后慢慢的有了人工配制，培養(yǎng)基的配制有著質(zhì)控、貯存等要求，那么具體有哪些要求呢？配制培養(yǎng)基的各項要求公布·處方、配制方法、滅菌方法的驗證、PH值及一般要求；·強調(diào)容器材質(zhì)對培養(yǎng)基質(zhì)量的影響(一般為玻璃容器)。自配培養(yǎng)基的保存要求：自配培養(yǎng)基標(biāo)記（信息）、貯藏、注意事項及作廢培養(yǎng)基的處理；自配培養(yǎng)基標(biāo)記，增加“配置人”信息。質(zhì)量控制質(zhì)控程序、常規(guī)檢測項目、過程控制及適用性實驗、環(huán)境檢測培養(yǎng)基的要求。配制
無血清培養(yǎng)基的適應(yīng)性解析2021/09/08
細胞培養(yǎng)實驗中，培養(yǎng)基有著不可取代的地位。大家知道，血清是的天然培養(yǎng)基，而無血清培養(yǎng)基也有著功不可沒的作用，被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。遠慕生物為您分析解說無血清培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)實驗中的適應(yīng)性：一、適應(yīng)方法1.直接適應(yīng)細胞從血清的培養(yǎng)基為基。2.連續(xù)的適應(yīng)或脫機細胞從血清的培養(yǎng)基為SFM在幾個步驟。連續(xù)的適應(yīng)往往是細胞比直接適應(yīng)嚴(yán)酷少。二、連續(xù)的適應(yīng)通道1，75%血清的培養(yǎng)基：25%基通道2，50%血清的培養(yǎng)基：50%基通道3，25%血清的培
國產(chǎn)對照品標(biāo)定方法的選擇2021/09/08
對照品用于鑒別、檢查、含量測定、雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)檢查等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它是國家藥品標(biāo)準(zhǔn)不可分割的組成部分。采用化學(xué)方法來測定，我們一起擦亮雙眼看國產(chǎn)對照品標(biāo)定方法的選擇！1.供試品的取用量應(yīng)滿足滴定精度的要求(消耗滴定液約20ml)；2.滴定終點的判斷要明確，提供滴定曲線。如選用指示劑法，應(yīng)考慮其變色敏銳，并用電位法校準(zhǔn)其終點顏色。3.為排除因加入其它試劑而混入雜質(zhì)對測定結(jié)果的影響，或便于剩余滴定法的計算，可采用“將滴定的結(jié)果用空白試驗校正”的辦法；4.要給出滴定度(采用四位有效數(shù)字)的推導(dǎo)過程。標(biāo)定結(jié)
一抗的選擇要點和技巧，必看！2021/09/08
免疫組化實驗是一種很嚴(yán)密的實驗，對抗體的選擇哪也有很高的要求，免疫組化所有的抗體主要是一抗，如何選擇免疫組化中的一抗？下面我們就來了解下。（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，就象dao彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對較低；而多克隆抗體
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